PCR全家桶:PCR,qPCR,RT-PCR,RT-qPCR有什么不同呢?
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
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PCR實驗是我們實驗室做過比較多的熱門實驗之一,今天和大家詳細(xì)分解pcr全家桶的成員!
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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),簡稱PCR,是一種在實驗室環(huán)境下進(jìn)行的DNA快速擴(kuò)增技術(shù),利用DNA聚合酶的催化活性,以一段已知的DNA序列(即母鏈DNA)作為復(fù)制的模板。在進(jìn)行PCR反應(yīng)時,我們會設(shè)計并加入特定的引物,這些引物會與母鏈DNA的特定區(qū)域結(jié)合,作為新DNA鏈合成的起始點。
反應(yīng)體系中還包括dNTP(即脫氧核苷三磷酸,是DNA的基本組成單元)、Mg2+(作為DNA聚合酶的輔因子)以及其他一些延伸因子和擴(kuò)增增強(qiáng)因子,它們共同為DNA的合成提供了必要的原料和環(huán)境。
PCR反應(yīng)的過程可以概括為三個主要步驟:首先是變性,通過加熱使雙鏈DNA解開成單鏈;接著是退火,降低溫度讓引物與模板DNA特異性結(jié)合;最后是延伸,DNA聚合酶以引物為起點,沿著模板DNA的方向合成新的DNA鏈。通過不斷地重復(fù)這三個步驟,PCR技術(shù)能夠在體外迅速且特異性地擴(kuò)增出大量的與母鏈DNA互補(bǔ)的子鏈DNA。
【一】、PCR,qPCR,RT-PCR,RT-qPCR四種技術(shù)的主要區(qū)別