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—— 從造模到數據分析的全流程關鍵點

    非酒精性脂肪肝（NAFLD）動物模型實驗注意事項由普拉特澤生物為大家總結分享，普拉特澤生物動物實驗平臺專業(yè)承接裸鼠成瘤實驗外包、動物造模等動物實驗代做服務，積累專業(yè)豐富的實驗操作經驗。
上期我們分享非酒精性脂肪肝NAFLD模型常見問題及解決方案后大家都說不夠詳細，有一些注意事項沒有寫出來
那今天咱們就為大家專門出一期非酒精性脂肪肝（NAFLD）動物模型實驗注意事項，快點學起來吧！

通過之前的學習我們都知道建立穩(wěn)定的非酒精性脂肪肝（NAFLD）動物模型是研究該疾病發(fā)病機制及藥物療效的關鍵步驟。然而，實驗過程中常因操作不當、模型選擇錯誤或數據采集不規(guī)范導致結果不可靠。
本期系統(tǒng)梳理NAFLD模型實驗中的關鍵注意事項，幫助研究者提高實驗成功率，減少誤差。

一、模型選擇：匹配研究目標是成功的第一步

1. 不同研究目的的最佳模型選擇

單純脂肪變性研究：高脂飲食(HFD)12-16周

NASH(炎癥+脂肪變性)研究：MCD飲食4-6周或HFHFrHC飲食20-30周

纖維化研究：HFHFrHC+低劑量CCL4(0.2mL/kg/周)

專家建議：基因修飾模型(如ob/ob小鼠)適合代謝研究，但需結合飲食干預才能誘導NASH！

二、動物選擇：這些細節(jié)決定實驗成敗

2. 品系與性別的科學選擇

①首選品系：C57BL/6(對高脂飲食最敏感)

②性別差異：雄性更易形成脂肪肝(雌性需去卵巢或延長造模時間30%)

③周齡控制：8-12周齡小鼠，同批次年齡差≤3天

④實驗證明：年齡差異過大會導致代謝指標波動高達25%！

三、飼養(yǎng)管理：不可忽視的環(huán)境因素

3. 飼料選擇與保存要點

①HFD配方：60%脂肪(推薦Research Diets D12492)

②MCD飲食：短期造?？?但需密切監(jiān)測體重)

③保存條件：-20℃密封，開封后2周內用完

4. 標準化飼養(yǎng)環(huán)境

①溫濕度控制：22±1℃，50-60%濕度

②光照周期：固定12h/12h光暗循環(huán)

③飼養(yǎng)方式：代謝研究建議單籠飼養(yǎng)

④數據警示：溫度波動超過2℃可使肝脂含量差異達15%！

四、實驗操作：這些步驟最容易出錯

5. 標準化取材流程

①禁食處理：統(tǒng)一禁食6小時

②取材時間：固定上午9-11點(減少晝夜影響)

③樣本處理：離體5分鐘內液氮速凍

6. 肝臟樣本處理方法

分區(qū)取材：左葉生化檢測，右葉病理分析

固定選擇：

石蠟切片：4%多聚甲醛固定24h

冰凍切片：OCT包埋-80℃保存

經驗分享：取材時間不統(tǒng)一可使ALT值波動30%以上！

五、檢測指標：多維度驗證模型成功

7. 必測基礎指標

體重/肝重比：增加≥30%表明模型成功

肝功能：ALT/AST>1提示脂肪性肝炎

胰島素抵抗：HOMA-IR指數增加2倍

8. 組織學評估標準

H&E染色：NAS評分(脂肪變性+炎癥+氣球樣變)

天狼星紅：纖維化分期(Ishak/METAVIR)

油紅O：脂肪變性定量(ImageJ分析)

六、常見問題：這些坑千萬別踩

9. 模型不成功的解決方案

脂肪變性不明顯：

? 檢查飼料是否氧化

? 延長造模至16周以上

炎癥評分低：

? 增加1-2%膽固醇

? 改用HFHFrHC飲食

纖維化不穩(wěn)定：

? 結合CCL4干預

? 延長至24周以上

10. 數據可重復性保障

①內參對照：β-actin+GAPDH雙內參

②技術重復：每個樣本≥3次重復

③陽性對照：每批實驗設置參考樣本

④發(fā)表必備：論文中必須注明動物品系、周齡、飼料配方等關鍵信息！

七、前沿技術：提升研究水平的新選擇

⒈活體成像技術：MRI-PDFF無創(chuàng)檢測肝脂含量

⒉單細胞測序：解析NAFLD肝細胞異質性

⒊空間轉錄組：定位脂肪變性相關基因表達

總結：NAFLD模型成功的黃金法則

① 精準匹配：根據研究目的選擇最佳模型

②嚴格標準化：從飼養(yǎng)到取材全程控制

③多維度驗證：代謝+病理+分子三位一體

④數據嚴謹性：設對照+重復+盲法評估

掌握這些關鍵點，你的NAFLD研究將更具說服力和可重復性！建議立即收藏起來做NAFLD模型實驗的備用可以直接聯系我們：18570028002 或 微信 pulateze666會把這些資料發(fā)送給大家哦。