腦缺血動物造模實操注意事項【腦缺血模型外包】
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
腦缺血再灌注模型操作注意事項由普拉特澤生物技術(shù)為大家總結(jié)分享,上期動物實驗平臺分享了大腦中動脈栓塞 (MCAO) 模型和二血管阻塞慢性腦缺血模型的詳細造模步驟,也受到了一些回與私信,一起來看看大家在實際的操作中都有哪些需要注意的地方吧!
一、大腦中動脈栓塞 (MCAO) 模型造模操作注意事項
1、分離時要層次清楚:正中切開SD大鼠頸部皮膚,分離皮下結(jié)締組織時會發(fā)現(xiàn)該組織與頸部兩側(cè)鼓泡腺體(很多人誤認為那是甲狀腺)結(jié)合緊密,因此不必分離過于太細,直接在正中兩側(cè)鼓泡腺體之間分離,這樣能不接觸胸鎖乳突肌而直接暴露頸前肌群且不會損傷腺體造成過多出血。下一步是分開頸前肌群,這時候要注意用小鉗子作撐開,分離動作要在左右肌肉塊之間而不是一塊肌肉的肌纖維之間,雖然它們看起來很模糊,但這樣能保證不會出現(xiàn)較多條索狀細肌纖維條,影響下一步頸內(nèi)動脈的尋找與分離,并且能整塊地向一側(cè)牽開頸前肌群暴露頸動脈鞘。見到頸動脈鞘了則要注意細致分離迷走神經(jīng),若損傷則可能影響其呼吸而死亡的。
2、血管分離管時,要量將血管剝離的干凈些,這樣在用眼科剪剪口時就不會誤剪外膜(誤剪的話再剪就很容易把口剪大了或者剪斷了,要注意口子越小越好插線),且要剪一個斜行的切口(眼科剪與血管約成45度),這樣在血液剛流出時仍能看上翻的斷口管壁,這樣既容易插入栓線且血管受得了插線時一定的牽拉。當然,切勿牽拉過猛,以免使血管發(fā)生痙攣,導致栓線不能順利進入。
3、注意盡量不要損傷神經(jīng)。
4、線進入后頸內(nèi)動脈后即可逐漸插入了,有時候很順利一插到底,但有時候在中間就怎么也進不去了,這是因為在血管入顱穿過顱骨時有一個狹窄或者角度。因此,碰上這種明顯阻力時,一定不能盲目向前使力插,越插栓線前端越變形越進不去且容易損傷血管。這時候正確的作法是往外抽出較多栓線,也許會有一定的動脈血流出,不必慌,只要順著血管走向調(diào)整一下進線角度輕柔的使勁,一般都能進去,反復試幾次還不行最好換根栓線,很可能前端已經(jīng)角度變了!頸內(nèi)動脈的走向為內(nèi)上方,可以用鑷子夾住魚線插,但進去后要注意,別太用力,要不血管就要破了。
5、栓線不能在血管里反復進退,否則及容易造成蛛網(wǎng)膜下腔出血,而且很容易誤解為模型成功,因為這時的神經(jīng)功能改變也很明顯,但并不是由于栓塞引起的。
6、進線時,使栓線有一定程度的彎曲,且只要保證栓線向顱頂方向彎曲,一般都能將線插入顱內(nèi),決不會進入翼腭。
7、術(shù)后注意保暖。
8、性激素對腦梗死面積有較大影響,應采用單一性別的動物進行實驗。
9、大鼠大腦中動脈永久性閉塞性腦缺血模型,梗死體積出現(xiàn)的最小時間點可能為2h,體積隨時間進行性增大,至12h基本趨于穩(wěn)定。
10、 對干插線已經(jīng)熟練的操作者來說,如果一次遇到大多數(shù)動物插不進線去或者死亡率特別高,就要考慮是否是動物的問題。動物往往出現(xiàn)血管變異,尤其是飼養(yǎng)很久的動物,動物來源對死亡率影響很大。
二、血管阻塞慢性腦缺血模型造模注意事項
1、在手術(shù)過程中,直腸和大腦的溫度必須控制在(37±0.2)℃。大腦的溫度尤其重要,因為沒有血供會引起大腦溫度的下降;而大腦溫度的微小變化對于缺血引起的組織學損傷會產(chǎn)生顯著的影響。
2、手術(shù)前夜對小鼠禁食以維持血糖水平的穩(wěn)定同樣非常重要。卒中前高水平血糖通常會引起更加嚴重的神經(jīng)元損傷。
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