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  大家好！今天普拉特澤生物照常跟大家一起學(xué)習(xí)新實(shí)驗(yàn)——活性氧（ROS）檢測(cè)！活性氧（ROS）是含氧的化學(xué)反應(yīng)性化學(xué)物質(zhì)，活性氧檢測(cè)一案板可以通過(guò)燃亮染色后病理觀察或者用流式的方法進(jìn)行檢測(cè)。普拉特澤生物流式檢測(cè)平臺(tái)承接活性氧檢測(cè)多例，在對(duì)樣本的檢測(cè)與方法上都有專業(yè)的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，本文就跟大家一起簡(jiǎn)單聊聊什么是活性氧檢測(cè)~

  氧是生命運(yùn)動(dòng)過(guò)程中不可缺少的一種氣體，人們一旦處于缺氧或者供氧不足的環(huán)境中，就會(huì)感到憋氣的痛苦甚至死亡。所以，自從發(fā)現(xiàn)氧以來(lái)氧一直被人們認(rèn)為是一種對(duì)人體百益而無(wú)一害的氣體。可是生命科學(xué)迅速發(fā)展的今天，人體內(nèi)的各種器官隨著年齡增大而不斷老化促使科學(xué)家們?cè)诟鱾€(gè)領(lǐng)域探索原因與機(jī)制，1969年McCord與Fridovich發(fā)現(xiàn)在生化反應(yīng)過(guò)程中o獲得一個(gè)電子還原生成超氧自由基(0))進(jìn)而經(jīng)過(guò)紅血球的分離精制后獲得0的清除滅活酶并命名為超氧化物歧化酶，激發(fā)了大批的科學(xué)研究者致力于o，的生成過(guò)程、反應(yīng)活性、毒性、生理和病理等方面的研究。同時(shí)由0，衍生出來(lái)的過(guò)氧化氫(HO)羥自由基(OH)激發(fā)態(tài)氧(一重態(tài)氧或稱單線態(tài)氧0)也受到了人們的重視。

  那么活性氧檢測(cè)有什么意義呢？

  活性氧是生命活動(dòng)中不可缺少的活性物質(zhì)，自由基在體內(nèi)可提高一些酶的活性，如核苷酸的合成和肝臟的解毒過(guò)程中，自由基可激活某些合成酶或解毒酶。自由基還參與機(jī)體內(nèi)一些活性物質(zhì)如前列腺素的合成。炎癥過(guò)程中，自由基可促進(jìn)炎性細(xì)胞吞噬細(xì)菌和殺死細(xì)菌，如中性粒細(xì)胞發(fā)生呼吸爆發(fā)時(shí)產(chǎn)生大量自由基，可殺死病原體。

       ROS更多被喊予明確的病理意義，ROS可對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，核酸和蛋白分子產(chǎn)生氧化作用，引起其結(jié)構(gòu)和功能障礙。ROS增多導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)(Oxidative Stress)造成細(xì)胞損傷，參與多種病理機(jī)制。百種以上的疾病狀態(tài)都可能有ROS的參與。機(jī)體通過(guò)一系列抗氧化機(jī)制，維持ROS的平衡，如超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase.SOD)、過(guò)氧化氛酶(Catalase)等酶類和一些小分子還原物質(zhì)，可去除細(xì)胞生成的ROS。檢測(cè)細(xì)胞ROS的含量，可以了解ROS在細(xì)胞一些生理和病理狀態(tài)中的變化，分析藥物效應(yīng)和相關(guān)機(jī)制，由于ROS在體內(nèi)存在的半意期很短，僅為15秒左右，需要用敏感的方法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，常用的ROS測(cè)定方法包括luminol及其它化合物與氧自由基的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)、ROS的電子自旋共振(electron spin resonance,ESR)測(cè)定，和自由基反應(yīng)性熒光染料的測(cè)定方法。

  我們最常用的方法是化學(xué)發(fā)光法，化學(xué)發(fā)光測(cè)定法是儀器分析中靈敏度最高的方法之一，它的特點(diǎn)是化學(xué)反應(yīng)與發(fā)光現(xiàn)象同時(shí)發(fā)生，從而有望成為不穩(wěn)定化合物的在線、原位分析的有效手段。

  化學(xué)發(fā)光研究也是活性氧測(cè)定法研究領(lǐng)域中比較活躍的分支之一，特別是針對(duì)H₂O₂測(cè)定，有許多靈敏度高、選擇性好的化學(xué)發(fā)光體系。進(jìn)年來(lái)，在HO2測(cè)定方面開(kāi)發(fā)了一系列高靈敏度的化學(xué)發(fā)光分析法，除此之外，目前比較成功的活性氧化學(xué)發(fā)光測(cè)定法主要有魯米諾(Luminol)法、光澤精法(Lucioenin)和甲殼動(dòng)物熒光素(Cvpridina)法等。

  再就是和自由基反應(yīng)性染料的測(cè)定方法，常用的是DCFH-DA。DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜。進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不會(huì)通透細(xì)胞膜，因此探針很容易被積聚在細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧能夠氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF。綠色熒光強(qiáng)度與活性氧的水平成正比。在最大激發(fā)波長(zhǎng)480 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)525 nm處，使用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡等檢測(cè)熒光信號(hào)。Rosup為活性氧陽(yáng)性誘導(dǎo)藥物，根據(jù)其熒光信號(hào)強(qiáng)度，可分析活性氧的真正水平。

        好啦，那關(guān)于活性氧檢測(cè)的介紹小編就介紹到這里啦，后面兩期給大家詳細(xì)分下化學(xué)發(fā)光法和熒光法（和自由基反應(yīng)性染料檢測(cè)法）的詳細(xì)操作步驟，如果您對(duì)活性氧檢測(cè)的檢測(cè)方法有什么疑問(wèn)或有活性氧檢測(cè)外包的需求，歡迎隨時(shí)留言與技術(shù)討論~