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細(xì)胞遷移 (cell migration) 也稱為細(xì)胞爬行、細(xì)胞移動(dòng)或細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，是指細(xì)胞在接收到遷移信號(hào)或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動(dòng)。細(xì)胞遷移為細(xì)胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細(xì)胞體尾部收縮在時(shí)空上的交替過(guò)程。細(xì)胞遷移是正常細(xì)胞的基本功能之一，是機(jī)體正常生長(zhǎng)發(fā)育的生理過(guò)程，也是活細(xì)胞普遍存在的一種運(yùn)動(dòng)形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥轉(zhuǎn)移等過(guò)程中都涉及細(xì)胞遷移。

目前人們對(duì)惡性腫瘤的研究是多方面的，從癌癥的產(chǎn)生到轉(zhuǎn)移，血管供給以及分裂增殖都一直是醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究的熱點(diǎn)。對(duì)于腫瘤細(xì)胞而言，其遷移特性已經(jīng)成為評(píng)價(jià)抗腫瘤藥物的重要特征；研究細(xì)胞遷移的方法較多，如劃痕法、Transwell、實(shí)時(shí)細(xì)胞追蹤和細(xì)胞芯片法等。

   今天主要給大家介紹一種應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)方法：細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

一、細(xì)胞劃痕的實(shí)驗(yàn)原理

   細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)(Wound Healing) 是一種研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外實(shí)驗(yàn)方法。這種方法的原理為當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕”，劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合，于細(xì)胞遷移過(guò)程中在開始和定期捕獲圖像，通過(guò)測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的劃痕間距并計(jì)算差值，可對(duì)細(xì)胞的遷移能力做出判斷。
   傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法：在融合的單層細(xì)胞上用槍頭比著直尺盡量垂直于背后的橫線劃痕；

二、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)步驟

   ①劃線，首先用馬克筆在六孔板的背部進(jìn)行劃線，每孔劃3-5條線

   ②鋪板，調(diào)整好細(xì)胞狀態(tài)后，每孔鋪6×10⁵個(gè)細(xì)胞，鋪板的密度需要根據(jù)細(xì)胞本身的生長(zhǎng)特性適當(dāng)調(diào)整

   ③劃痕，當(dāng)細(xì)胞鋪滿單層之后，用10μL的槍頭緊貼直尺，垂直于馬克筆標(biāo)記的橫線在孔中劃線

   ④圖像采集，在100倍顯微鏡下拍照，保證劃痕居中，同時(shí)注意背景一致。

三、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

   1、圖片處理及劃痕寬度測(cè)量

   方法一：PS軟件劃線測(cè)劃痕寬度

   方法二：ImageJ軟件測(cè)劃痕面積

   2、愈合率計(jì)算及柱狀圖展示

   以時(shí)間為橫坐標(biāo)，愈合度為縱坐標(biāo)進(jìn)行結(jié)果的呈現(xiàn)

四、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)適用范圍

   研究細(xì)胞基質(zhì)和細(xì)胞間相互作用對(duì)細(xì)胞遷移的影響

   1.可用于探究藥物、基因等外源因素對(duì)細(xì)胞遷移的影響

   2.一般適用于檢測(cè)貼壁生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的遷移轉(zhuǎn)移能力(上皮細(xì)胞、纖維樣細(xì)胞等)

       ①這些細(xì)胞本身具較強(qiáng)遷移能力
       ②細(xì)胞對(duì)無(wú)血清或低血清的有較強(qiáng)的耐受力(至少24小時(shí))

五、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

   1、細(xì)胞劃痕時(shí)細(xì)胞沒(méi)有長(zhǎng)滿，或是長(zhǎng)的太滿

   鋪板時(shí)的數(shù)量需根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)、增殖速度、大小進(jìn)行調(diào)節(jié)，細(xì)胞較小或增殖速度慢，鋪板數(shù)量需多于6×10⁵個(gè)細(xì)胞/孔；細(xì)胞較大或增殖速度較快則需少于6×10⁵個(gè)細(xì)胞/孔。
   2、怎么樣減少劃痕距離的誤差
   不同孔之間劃痕最好使用同一只槍頭，劃痕時(shí)槍頭垂直，不能傾斜，可比著直尺，保持力度一致，一次性劃完。
   3、劃痕實(shí)驗(yàn)過(guò)程中培養(yǎng)條件為什么是無(wú)血清或是低血清

   可以減少單純的細(xì)胞增殖對(duì)遷移的影響。

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