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        外周血單細(xì)胞懸液制備步驟由普拉特澤生物細(xì)胞實驗平臺分享，細(xì)胞實驗平臺專為大家提供各類細(xì)胞實驗外包服務(wù)。單細(xì)胞懸液是把組織塊或貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞消化吹打以后形成的懸液，使粘連的細(xì)胞都分開，細(xì)胞本身是很脆弱的，解離過程中稍不注意就有可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡，時間的長短、濃度的大小、槍頭的使用，離心的設(shè)置等都會影響細(xì)胞的狀態(tài)，本文咱們就以外周血和貼壁細(xì)胞樣本為例，為大家介紹單細(xì)胞懸液的制作方法。

        ?、外周?樣本單細(xì)胞懸液制作步驟

       ?外周血單個核細(xì)胞（Peripheralblood mononuclear cells ，PBMCs ）的分離制備：

        1、醫(yī)院及其?液中?采取的新鮮的肝素抗凝的2 mL外周靜脈?備?；

        3、將肝素抗凝的靜脈??等體積的PBS稀釋并充分混勻；

        3、將?淋巴細(xì)胞分離液ficoll從 4 °C 取出，恢復(fù)?室溫，取4ml轉(zhuǎn)移?15 mL 試管中備?；

        4、??菌吸管吸取稀釋后的靜脈?，沿管壁緩慢???淋巴細(xì)胞分離液液?上

        （ficoll分離液：抗凝?1:1），緩緩地不要晃蕩，保持界?的清楚；

        5、將加完外周靜脈?后的 50 mL 試管放?臺式離?機(jī)中，2200 rpm ?平離?，

        室溫 25 min，注意離?機(jī)升降速都調(diào)?最慢，降速設(shè)置中?定要設(shè)置成no break，或者只有1成

        的制動。

        6、離?完畢后，??取出15 ml 試管，離?后管內(nèi)可分為三層，在上、中層界?處有?層以單

        個核細(xì)胞為主的??云霧層狹窄帶，即為我們所需要的單個核細(xì)胞；

        7、??菌吸管吸取??云霧層狹窄帶的單個核細(xì)胞，并置于另? 15 mL 離?管

        中，加?5 mLPBS，1500 rpm，室溫離? 5 min，并充分洗滌細(xì)胞兩次；

        8、末次離?后，棄去上清，加?完全 RPMI 1640 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，充分混勻；

        9、??細(xì)胞計數(shù)液計數(shù)單個核細(xì)胞，根據(jù)實驗所需，加?完全 1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度到所需要的濃度。

        二、貼壁細(xì)胞樣本單細(xì)胞懸液制作方法

        貼壁細(xì)胞（adherent cells）：活體體內(nèi)細(xì)胞當(dāng)離體置于體外培養(yǎng)時?多數(shù)以貼壁?式?長，主要包括正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。

        胰蛋?酶消化

        胰蛋?酶：最常?，濃度?般0.25%-5%，37℃消化時間?般1-5min，??清終?；

        外周血與貼壁細(xì)胞的單細(xì)胞懸液制作方法就介紹完啦，希望能幫到正在準(zhǔn)備學(xué)習(xí)單細(xì)胞懸液制備的你~如果您還有什么其他問題歡迎隨時聯(lián)系，普拉特澤生物隨時在線~