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        動物細胞傳代培養(yǎng)詳細操作步驟由普拉特澤生物總結平臺分享。普拉特澤細胞實驗平臺專業(yè)提供各類細胞實驗外包服務，細胞的分離培養(yǎng)傳代作為所有細胞實驗的基礎讓然是不在話下，傳代培養(yǎng)是細胞培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一，也是所有細胞生物學實驗的基礎，上期我們以小鼠為例介紹了原代細胞取材培養(yǎng)的操作步驟，今天咱們就來看看和傳代細胞的培養(yǎng)是哪些步驟跟注意事項吧！

   動物細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

        1、觀察培養(yǎng)基是否正常，細胞狀態(tài)如何，細胞密度如何，決定是否傳代。觀察時擰緊蓋子。

          2、加熱PBS、versene、培養(yǎng)基，(提前做好) 瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。

        3、打開超凈臺(先開風機，后開照明)，用75%乙醇清潔臺面，點燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個，置于架子上。

        4、取尖吸管、吸量管各一支，放置在專用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。

        5、取待傳代的細胞。打開versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時距離酒精燈心遠些，不要把渣滓?guī)нM去。把試劑拿入臺子的時候，盡量平穩(wěn)，不要讓試劑碰到瓶口。

        6、用吸量管吸取舊的培養(yǎng)基，置離心管中，吸量管加入versene，然后將versene瓶收起來。(加versene主要是為了將舊培養(yǎng)基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時都不要對著細胞。

        7、打開胰酶，然后將versene棄掉。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶后，盡快放平，使細胞消化時間一致。

        8、將細胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打開PBS. 之后拿出來鏡下隨時觀察。使用二次消化法，去除容器中殘余的細胞，別忘了用舊培養(yǎng)基中和。

        9、取細胞，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之后(細胞變圓，但不漂起)，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養(yǎng)基加入細胞，吹打，至所有細胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來。用PBS洗細胞，versene對細胞有毒性，且不能被血清中和。然后吸取至離心管中，800 rpm離心5分鐘。

        10、吸量管吸取適量培養(yǎng)基加入新的培養(yǎng)皿中。

        11、細胞離心畢，用吸新培養(yǎng)基的管棄去上清，先把泡沫吸走。換吸量管吸取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基適量，加入離心管，小體積混勻，將細胞重懸，尖吸管吹勻。

        12、擦計數(shù)板，用槍吸10ul的液體，計數(shù)。不要把槍伸到離心管內(nèi)。

        13、吸量管吸取細胞懸液，加入新的培養(yǎng)皿中。鏡下觀察，搖勻，放入37度孵育。收超凈臺。

        那動物細胞傳代培養(yǎng)時需要注意哪些注意事項呢？

        1、嚴格保證無菌操作：細胞離體后非常脆弱，容易被細菌、真菌、支原體等感染，且細菌生存能力強，一般的細菌傳一代只有十幾分鐘而細胞卻需要好幾天，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質會被細菌消耗殆盡，而且細菌等在生長過程中分泌的毒性也會造成細胞的死亡，使傳代失敗。

        2、控制消化時間：細胞消化過度會導致相當一部分細胞損傷和死亡，如果細胞團中都是死細胞，則不會貼壁；如果細胞團中仍存在有活力的細胞，就會貼壁造成局部細胞密度不均勻，該局部較快形成中央壞死細胞區(qū)，難以培養(yǎng)傳代失敗。

        3、及時關注細胞生長狀態(tài)：日常觀察培養(yǎng)液的顏色與透明度、細胞形態(tài)變化、細胞污染的觀察及防治、細胞生長狀況。

        好啦，動物細胞的傳代細胞培養(yǎng)詳細的操作步驟咱們就全部講完了，如果您有細胞實驗外包代做或關于細胞實驗有相關的技術問題需要咨詢的話歡迎給咱們留言，細胞平臺的技術小哥哥姐姐非常樂意給大家進行技術上的交流與科研上的協(xié)助！

        那我們下期見~

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