ELISA實(shí)驗(yàn)方法有哪些?
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)的實(shí)驗(yàn)方法有多種,每種方法都有其特定的應(yīng)用范圍和優(yōu)缺點(diǎn)。 ELISA實(shí)驗(yàn)介紹由普拉特澤生物分子檢測品臺總結(jié)分享,分子檢測平臺為廣大科研實(shí)驗(yàn)人員提供ELISA實(shí)驗(yàn)外包實(shí)驗(yàn)服務(wù)
以下是幾種常見的ELISA實(shí)驗(yàn)方法
一、間接ELISA法
間接ELISA法是最常用的ELISA方法之一。其基本原理是將抗原固定在固相載體上,加入待測樣本后,如果樣本中存在特異性抗體,則與抗原結(jié)合形成抗原-抗體復(fù)合物。隨后加入酶標(biāo)記的二抗(針對一抗的抗體),與一抗結(jié)合形成酶標(biāo)二抗-一抗-抗原復(fù)合物。最后加入底物,酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng),根據(jù)顏色的深淺程度可間接推斷待測樣本中特異性抗體的含量。
二、夾心ELISA法
夾心ELISA法主要用于檢測樣本中的抗原。將兩種特異性抗體分別固定在固相載體上,形成“抗體-抗原-抗體”的夾心結(jié)構(gòu)。當(dāng)待測樣本加入后,其中的抗原與兩種抗體結(jié)合,形成夾心復(fù)合物。隨后加入酶標(biāo)記的二抗,與其中一種抗體結(jié)合,最后加入底物顯色,通過顏色深淺判斷抗原含量。
三、競爭ELISA法
競爭ELISA法主要用于檢測樣本中的小分子抗原或半抗原。將特異性抗體固定在固相載體上,加入待測樣本中的抗原和一定量的酶標(biāo)記抗原。兩者與抗體競爭結(jié)合位點(diǎn),如果待測抗原濃度高,則酶標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合的機(jī)會減少,反之亦然。最后加入底物顯色,根據(jù)顏色深淺可推算出待測抗原的濃度。
夾心Elisa和競爭性 Elisa的區(qū)別
四、捕獲ELISA法
捕獲ELISA法主要用于檢測樣本中的免疫球蛋白,如IgM、IgG等。將一種特異性抗體固定在固相載體上,用于捕獲待測樣本中的免疫球蛋白。隨后加入酶標(biāo)記的二抗,與捕獲的免疫球蛋白結(jié)合,最后加入底物顯色,根據(jù)顏色深淺判斷免疫球蛋白的含量。
下面以表格呈現(xiàn)方式:
應(yīng)用與前景
隨著生物醫(yī)學(xué)研究的深入,ELISA技術(shù)也在不斷發(fā)展和完善。除了上述幾種常見方法外,還有諸如時間分辨熒光免疫分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析等新型ELISA技術(shù)不斷涌現(xiàn)。這些新技術(shù)不僅提高了檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性,還拓寬了ELISA的應(yīng)用領(lǐng)域。
總之,ELISA實(shí)驗(yàn)方法具有多種類型,每種方法都有其特定的適用范圍和優(yōu)缺點(diǎn)。在實(shí)際應(yīng)用中,應(yīng)根據(jù)待測樣品的性質(zhì)、檢測目的和實(shí)驗(yàn)室條件選擇合適的ELISA方法。同時,為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作,并注意實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生和安全。
ELISA實(shí)驗(yàn)流程
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