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在miRNA研究的這條路已經(jīng)車水馬龍了，如何在蕓蕓眾生中抓住審稿人的視線獲得高分文章，就需要研究者有豐富的知識(shí)體系和創(chuàng)新精神了。

這次小編帶大家解讀的文獻(xiàn)就很好的詮釋了這點(diǎn)：咱不研究miRNA，咱研究功能跟miRNA很相似的RNA結(jié)合蛋白。下面就跟著小編來看下這篇文獻(xiàn)吧。

文章題目：

翻譯：RNA結(jié)合蛋白ZFP36L1與HSP70家族在骨性關(guān)節(jié)炎OA中的作用

一、名詞解釋：

HSPA1A：熱休克蛋白70（HSP70）家族成員之一

ZFP36：一種古老的RNA結(jié)合蛋白，可以與靶mRNA的3'-UTR中的ARE結(jié)合來觸發(fā)ARE介導(dǎo)的mRNA去穩(wěn)定化

二、研究背景：

骨關(guān)節(jié)炎（OA）是導(dǎo)致殘疾的主要原因，軟骨破壞作為OA發(fā)病機(jī)制標(biāo)志是由基質(zhì)降解酶的上調(diào)或軟骨細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）分子的下調(diào)引起的。RNA結(jié)合蛋白可以直接結(jié)合其靶mRNA的3'-非翻譯區(qū)（3'-UTR）中的富含AU的元件（ARE），并促進(jìn)poly-A尾部去除和mRNA衰變。

三、研究正文：

研究者首先在OA患者和OA模型小鼠（DMM韌帶剪斷手術(shù)造模）的軟骨組織中發(fā)現(xiàn)ZFP36L1的蛋白含量相比于正常軟骨組織有明顯的升高，同時(shí)基質(zhì)降解酶MMP3、MMP13表達(dá)下調(diào)（見下圖（a）IHC檢測結(jié)果）。

作者猜測ZFP36L1可能與OA有關(guān)。于是通過構(gòu)建腺病毒過表達(dá)系統(tǒng)，在動(dòng)物模型上實(shí)現(xiàn)ZFP36L1的上調(diào)表達(dá)。發(fā)現(xiàn)：ZFP36L1的過表達(dá)并不影響OA的疾病進(jìn)程，即既不改變軟骨組織中基質(zhì)降解酶的含量也不影響軟骨細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）相關(guān)分子Coll-II和Aggrecan的表達(dá)改變（下圖c）。

隨后，作者制備了兩種不同的模型鼠：

① 12周齡的Zfp36l1-/-基因敲除雄性小鼠，并做韌帶切斷手術(shù)制備OA模型；

② 常規(guī)小鼠做韌帶切斷后尾靜脈注射Zfp36l1干擾腺病毒；發(fā)現(xiàn)Zfp36l1低表達(dá)的小鼠模型中，OA的疾病表癥顯著低于未敲除組：番紅固綠染色（下圖a&c），OA評(píng)級(jí)、骨錐成熟度、軟骨下骨板厚度（下圖b&d），

以上作者充分證實(shí)了ZFP36L1的下調(diào)表達(dá)能夠顯著的抑制骨性關(guān)節(jié)炎，那么接下來，作者進(jìn)一步探討了ZFP36L1在OA中的作用機(jī)制。

首先，先上一波測序，作者發(fā)現(xiàn)對(duì)ZFP36L1進(jìn)行shRNA干擾后，有18個(gè)基因的mRNA水平出現(xiàn)了顯著上調(diào)（flod change＞2.0），以Hspa1a和Hspa1b最為顯著（下圖a）。由于HSPA1a和HSPA1b結(jié)構(gòu)差別不大（10個(gè)核苷酸和1個(gè)氨基酸的差別），在此作者接下來只研究HSPA1a。作者通過RIP發(fā)現(xiàn)ZFP36L1結(jié)合HSPA1a的3'-UTR區(qū)（下圖d），由此可得ZFP36L1直接調(diào)控HSPA1a。

考慮到熱休克蛋白70（HSP70）家族對(duì)多種細(xì)胞的炎癥，氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡有保護(hù)作用，為了驗(yàn)證HSPA1a是否參與ZFP36L1敲低對(duì)OA發(fā)病機(jī)制的抑制作用，研究者用腺病毒在OA模型鼠中過表達(dá)了HSPA1a（下圖a），并在DMM處理后的AO模型小鼠的膝關(guān)節(jié)軟骨組織發(fā)現(xiàn)：HSPA1a過表達(dá)組中番紅固綠染色顯示炎性減弱（下圖b&c），OA評(píng)級(jí)下降、骨錐成熟度無顯著性差異、軟骨下骨板厚度無顯著差異（下圖d）。

我們通常認(rèn)為OA的發(fā)病機(jī)制主要是由：①由基質(zhì)降解酶的上調(diào)；②軟骨細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）分子的下調(diào)；③軟骨細(xì)胞的凋亡引起的。

作者發(fā)現(xiàn)ZFP36L1敲低或HSPA1a過表達(dá)對(duì)基質(zhì)降解酶和軟骨ECM分子的表達(dá)水平并沒有顯著改變，可見二者并不是ZFP36L1-HSP70途徑的直接靶標(biāo)。考慮到軟骨細(xì)胞的凋亡在OA軟骨破壞中也起著重要作用，且HSPA1a有已知的可以保護(hù)各種細(xì)胞類型免于凋亡的功能。于是作者檢查了HSPA1a是否可以通過防止軟骨細(xì)胞凋亡從而達(dá)到抑制OA的作用。于是在過表達(dá)HSPA1a的OA模型鼠中觀察到了軟骨細(xì)胞凋亡的顯著減少，由此得出結(jié)論：HSPA1a可以直接抑制軟骨細(xì)胞凋亡。

最后，研究者調(diào)查了HSPA1a在ZFP36L1上調(diào)/下調(diào)的OA模型鼠中的作用，發(fā)現(xiàn)HSPA1a的敲除促進(jìn)了ZFP36L1在OA中的軟骨侵蝕能力，但不影響骨贅形成或軟骨下骨板增厚。

四、總結(jié)：

文章的幾個(gè)主要結(jié)論：

1、OA中RNA結(jié)合蛋白ZFP36L1的特異性上調(diào)，但外源進(jìn)行ZFP36L1基因的過表達(dá)并不能影響OA的疾病進(jìn)程，反之敲除可抑制。

2、ZFP36L1的直接作用靶點(diǎn)為HSPA1a，HSPA1a通過抑制軟骨細(xì)胞凋亡來預(yù)防OA，不參與骨贅形成和軟骨下骨板增厚。

3、在OA小鼠模型中，于膝關(guān)節(jié)腔中注射ZFP36L1-shRNA腺病毒或HSPA1a的過表達(dá)腺病毒能夠緩解小鼠的疾病進(jìn)程。

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