甲醇剛果紅染色實(shí)驗(yàn)介紹【剛果紅染色外包】
來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
大家好,今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)一種特殊的病理染色——甲醇是剛果紅染色。剛果紅染色法特指用剛果紅將纖維素染色的方法。剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物,常用的剛果紅染色法有兩種。普拉特澤生物病理平臺(tái)長(zhǎng)期為大家提供剛果紅染色外包服務(wù),本文我們先來(lái)看看什么是剛果紅染色?
剛果紅染色法特指纖維素的染色法,剛果紅能把纖維素染成紅色復(fù)合物,對(duì)纖維二糖和葡萄糖無(wú)作用,可用此來(lái)鑒別纖維素或纖維素分解菌的分解作用。剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅——纖維素的復(fù)合物便沒(méi)法形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。
我們常用的剛果紅染色法有兩種。
方法一,先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)
在長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基上,覆蓋質(zhì)量濃度為1 mg/mI。的CR溶液,10~15 min后,倒去CR溶液,加入物質(zhì)的量濃度為l mol/l的NaCI溶液,15 min后倒掉NaCl溶液,此時(shí),產(chǎn)生纖維素酶的菌落周?chē)鷮?huì)出現(xiàn)透明圈。
(加NaCl的原因:剛果紅是結(jié)合到培養(yǎng)基的多糖底物,但分解纖維素的細(xì)菌可以產(chǎn)纖維素酶,能分解這個(gè)多糖底物成為寡糖,這樣剛果紅就不能結(jié)合上去了,氯化鈉就可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去,這樣就留下大小不一的透明圈,大的透明圈分解纖維素的能力就強(qiáng))
方法二,在倒平板時(shí)就加入剛果紅
配制質(zhì)量濃度為10 mg/mI的CR溶液,滅菌后,按照每200 mI。培養(yǎng)基加入1 mI。的比例加入CR溶液,混勻后倒平板。等培養(yǎng)基上長(zhǎng)出茵落后,產(chǎn)生纖維素酶的菌落周?chē)鷮?huì)出現(xiàn)明顯的透明圈。
兩種剛果紅染色法的比較 : 剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應(yīng)用已經(jīng)有超過(guò)20年的歷史,課本中給出了兩種方法。
方法一是傳統(tǒng)的方法,優(yōu)缺點(diǎn)如下:
優(yōu)點(diǎn):這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。
缺點(diǎn):操作繁瑣,加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜;
方法二的優(yōu)缺點(diǎn)如下:
優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便,不存在菌落混雜問(wèn)題,
缺點(diǎn)1:由于在纖維素粉和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類(lèi)物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊,因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。
缺點(diǎn)2:有些微生物具有降解色素的能力,它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)降解剛果紅而形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分。
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