粒細胞檢測實驗原理與流程【粒細胞檢測外包】
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
粒細胞檢測實驗步驟由普拉特澤生物技術為大家總結分享,粒細胞可由其在瑞氏染色下的表現(xiàn)分為中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞三種組成。普拉特澤生物流式檢測平臺為廣大科研人員提供粒細胞檢測實驗外包服務,一起來學習吧!
粒細胞檢測最常用的方法是流式檢測,其實驗原理是流式利用不同熒光物質標記的單克隆抗體,與待測成分作用,然后上流式細胞儀檢測待測細胞。待測細胞隨流動室內的流動鞘液排列成單列,一個個迅速通過激光聚焦區(qū),激光在對每個細胞進行照射時可同時得到前向角散射和側向角散射2種散射光以及激發(fā)熒光標記物發(fā)出的信號,利用這些信號,可計算出相對含量,從而得到細胞群的相對比值。
一、常用的檢測指標中性粒細胞(人):CD15、CD16、CD49d(-)
噬堿性粒細胞(人):CD123、CD203c、CD117(-)
噬酸性粒細胞(人):CD11b、CD193、EMR1
中性粒細胞(鼠):CD11b、 Ly6G、CD115(-)
噬堿性粒細胞(鼠):CD200R3、 FcεRIα
噬酸性粒細胞(鼠):CD11b、CD193、F4 / 80
二、粒細胞檢測的實驗流程如下
1、制成單細胞懸液(組織樣本)
2、溶血(細胞樣本無需進行此步驟)
3、離心去上清
4、調整細胞密度
5、加入相應的標記抗體
6、孵育
7、洗滌后離心去上清
8、上機檢測
三、粒細胞檢測注意事項
1、為保證所得結果的可靠性,每次實驗前應用標準熒光微球檢測儀器的變異系數(shù);
2、每次應做陰性對照、陽性對照、質控對照、以確保將各種試劑及操作過程對結果的影響降至最低;
3、外周血單個核細胞(PBMC)是一些科研實驗中經常用的材料,是利用Ficoll從全血中提取得到,主要為淋巴細胞和單核細胞;需要檢測粒細胞等多形核細胞,就需要避免用PBMC需提供全血。
好啦,那關于粒細胞檢測的實驗方法就講完啦,如果您還還有什么其他的問題的話歡迎隨時聯(lián)系我們~