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 Question：描述巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)中細(xì)胞貼壁的過(guò)程？（普拉特澤生物提供長(zhǎng)期穩(wěn)定的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)）

答：巨噬細(xì)胞也稱組織細(xì)胞，是由血液中的單核細(xì)胞穿出血管后分化而成的。

在巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)中，細(xì)胞貼壁是一個(gè)至關(guān)重要的過(guò)程，它標(biāo)志著巨噬細(xì)胞成功附著于培養(yǎng)基底，并準(zhǔn)備開(kāi)始其生長(zhǎng)和功能活動(dòng)。以下是該過(guò)程的詳細(xì)描述，結(jié)合了相關(guān)數(shù)字和信息進(jìn)行歸納：

巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)中細(xì)胞貼壁的過(guò)程：

1. 細(xì)胞接種

?▲重懸細(xì)胞?：將離心后獲得的巨噬細(xì)胞沉淀用適量的細(xì)胞培養(yǎng)基（通常包含10%的胎牛血清和必要的抗生素）進(jìn)行重懸。重懸過(guò)程中需輕柔操作，避免對(duì)細(xì)胞造成損傷。

?▲細(xì)胞計(jì)數(shù)?：使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)重懸后的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確定細(xì)胞濃度。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，調(diào)整細(xì)胞濃度至適宜范圍。

?▲接種培養(yǎng)?：將調(diào)整濃度后的巨噬細(xì)胞懸液均勻接種到預(yù)先準(zhǔn)備好的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。接種密度一般為每平方厘米接種一定數(shù)量的細(xì)胞，具體數(shù)值根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)而定。

2. 貼壁過(guò)程

?①靜置培養(yǎng)?：將接種了巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)容器置于適宜的培養(yǎng)條件下（通常為37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中）進(jìn)行靜置培養(yǎng)。這一過(guò)程中，巨噬細(xì)胞會(huì)逐漸適應(yīng)新的環(huán)境并開(kāi)始貼附于培養(yǎng)基底。

?②貼壁時(shí)間?：巨噬細(xì)胞貼壁的時(shí)間因細(xì)胞種類、培養(yǎng)條件及操作手法等因素而異，但通常在接種后2-4小時(shí)內(nèi)即可觀察到明顯的貼壁現(xiàn)象。貼壁過(guò)程中，巨噬細(xì)胞會(huì)伸出偽足，與培養(yǎng)基底形成緊密的連接。

?③換液與純化?：
為了去除未貼壁的細(xì)胞及細(xì)胞碎片，通常在巨噬細(xì)胞貼壁后（如4-6小時(shí)后）進(jìn)行首次換液。換液時(shí)，應(yīng)輕柔操作，避免對(duì)貼壁的巨噬細(xì)胞造成沖擊。此外，為了純化培養(yǎng)體系中的巨噬細(xì)胞，還可以采用特定的方法去除其他類型的白細(xì)胞。

3. 貼壁后的觀察與培養(yǎng)

⒈形態(tài)觀察?：在顯微鏡下觀察貼壁后的巨噬細(xì)胞形態(tài)。貼壁成功的巨噬細(xì)胞通常呈圓形或橢圓形，具有較大的細(xì)胞核和豐富的細(xì)胞質(zhì)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，巨噬細(xì)胞會(huì)逐漸伸展并呈現(xiàn)出典型的巨噬細(xì)胞形態(tài)。

?⒉繼續(xù)培養(yǎng)?：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，繼續(xù)對(duì)貼壁后的巨噬細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)定期觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，并根據(jù)需要進(jìn)行換液、傳代等操作。同時(shí)，還需注意監(jiān)測(cè)培養(yǎng)環(huán)境的溫度、濕度和氣體濃度等參數(shù)，以確保巨噬細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和功能活動(dòng)。

通過(guò)以上步驟，巨噬細(xì)胞在原代培養(yǎng)中成功貼壁，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究提供了穩(wěn)定可靠的細(xì)胞來(lái)源。

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