PCR全家桶:PCR,qPCR,RT-PCR,RT-qPCR有什么不同呢?
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
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PCR實驗是我們實驗室做過比較多的熱門實驗之一,今天和大家詳細分解pcr全家桶的成員!
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聚合酶鏈式反應,簡稱PCR,是一種在實驗室環(huán)境下進行的DNA快速擴增技術,利用DNA聚合酶的催化活性,以一段已知的DNA序列(即母鏈DNA)作為復制的模板。在進行PCR反應時,我們會設計并加入特定的引物,這些引物會與母鏈DNA的特定區(qū)域結合,作為新DNA鏈合成的起始點。
反應體系中還包括dNTP(即脫氧核苷三磷酸,是DNA的基本組成單元)、Mg2+(作為DNA聚合酶的輔因子)以及其他一些延伸因子和擴增增強因子,它們共同為DNA的合成提供了必要的原料和環(huán)境。
PCR反應的過程可以概括為三個主要步驟:首先是變性,通過加熱使雙鏈DNA解開成單鏈;接著是退火,降低溫度讓引物與模板DNA特異性結合;最后是延伸,DNA聚合酶以引物為起點,沿著模板DNA的方向合成新的DNA鏈。通過不斷地重復這三個步驟,PCR技術能夠在體外迅速且特異性地擴增出大量的與母鏈DNA互補的子鏈DNA。
【一】、PCR,qPCR,RT-PCR,RT-qPCR四種技術的主要區(qū)別