如何正確進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色?看這里就夠了
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
想要正確進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色?沒問題,看完這篇你就夠了!考馬斯亮藍(lán)染色可是生物化學(xué)實驗中的“明星”方法,主要用于蛋白質(zhì)定量分析
特別是SDS-PAGE電泳分離后的蛋白質(zhì)條帶。
下面,就讓普拉特澤生物來給你詳細(xì)講解一下正確進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色的步驟吧!
一、實驗準(zhǔn)備
首先,你得準(zhǔn)備好這些“主角”和“配角”:SDS-PAGE電泳分離后的蛋白質(zhì)凝膠、考馬斯亮藍(lán)染色液、去染液、染色容器、水平搖床等。這些可都是染色過程中的“必備神器”哦! 二、 染色步驟
?▲電泳后處理?:將電泳后的凝膠取出,放入加有超純水的平皿中潤洗一下,去除殘留的電泳液。這一步就像是給凝膠“洗個澡”,讓它干干凈凈地迎接接下來的染色過程。
?▲加入染色液?:將染色液倒入染色容器中,然后將凝膠放入染色液中,確保凝膠完全浸沒在染色液中。接著,將染色容器放在水平搖床上震蕩染色。染色時間一般在30分鐘到2小時之間
具體取決于凝膠的厚度和溫度。這個過程就像是給凝膠“穿上一件藍(lán)色的外衣”。
▲觀察染色情況:在染色過程中,要時刻注意觀察凝膠的變色情況。當(dāng)看到清晰的蛋白質(zhì)染色條帶時,就說明染色已經(jīng)差不多了。這時候,就要及時停止染色,避免背景顏色過深。
三、去染步驟
▲倒出染色液?:染色結(jié)束后,將染色液倒出或回收(注意:染色液可以回收使用3次左右哦?。?。
▲加入去染液?:將去染液倒入染色容器中,確保凝膠完全浸沒在去染液中。然后,繼續(xù)將染色容器放在水平搖床上震蕩去染。
去染的目的是去除未與蛋白質(zhì)結(jié)合的多余染料以及可能存在的背景染色。
?▲調(diào)整去染時間?:去染時間的長短會影響背景顏色的深淺。一般來說,去染時間越長,背景顏色越淺。你可以根據(jù)實驗需求調(diào)整去染時間,直到背景清晰、蛋白質(zhì)條帶清晰可見為止。
四、觀察與記錄
最后一步啦!將凝膠放在顯微鏡下觀察結(jié)果,用相機(jī)或掃描儀記錄下這美妙的瞬間??粗切┍蝗境伤{(lán)色的蛋白質(zhì)條帶,是不是很有成就感呢?
五、注意事項
在染色過程中,要確保染色液和去染液都充分接觸到凝膠的每一部分,避免出現(xiàn)染色不均的情況。
染色和去染的時間要根據(jù)實驗需求進(jìn)行調(diào)整,避免染色過深或過淺。
在操作過程中要注意安全,避免染料濺到皮膚或眼睛中。
怎么樣?看完這篇詳細(xì)講解后,你是不是已經(jīng)掌握了正確進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色的方法了呢?快去試試吧!在實驗過程中有任何 不懂的都可以咨詢:18570028002(微信同號)