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        今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是細胞冷凍與復(fù)蘇操作的注意事項。在低于-700C 的超低溫條件下，有機體細胞內(nèi)部的生化反應(yīng)極其緩慢，甚至終止，可以達到保存細胞的目的；而復(fù)時一般也在1-2 分鐘內(nèi)即恢復(fù)到常溫，從而無冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生，凍存的細胞經(jīng)復(fù)蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能。普拉特澤生物——細胞實驗平臺專業(yè)承接各類細胞實驗代做，更保存有生物資源十余萬種，提供細胞質(zhì)粒購買服務(wù)，現(xiàn)在我們就來看看細胞的冷凍與復(fù)蘇的操作注意事項吧！

        一、細胞凍存注意事項

        1、 DMSO配制的時候會放熱，一定要等凍存液冷卻后使用，避免灼傷細胞；

        2、 細胞離心后盡量吸干凈上清液，減少培養(yǎng)基殘留，避免稀釋凍存液；

        3、 不建議手動梯度降溫，溫度不穩(wěn)定，容易降低存活率；

        4、 注意程序降溫盒內(nèi)異丙醇的量必須高于最低刻度線；凍存5次后異丙醇需要更換一次，以免影響凍存效果；程序降溫盒需恢復(fù)到室溫以后才能繼續(xù)使用，不能從冰箱拿出來直接使用；

        5、 細胞懸液加入凍存液以后盡量短時間的在常溫放置，DMSO常溫下對細胞損傷大，分裝完成后立即轉(zhuǎn)入程序降溫盒放到-80度冰箱，不需要放4度；

        6、 -80度凍存過夜后可以轉(zhuǎn)入液氮長期保存，轉(zhuǎn)入液氮的過程需要對凍存盒進行保冷，不要長時間在常溫暴露，避免凍存管融化；

        7、 若沒有液氮罐，存放在-80度的時候一定要放靠里面的位置，避免開關(guān)冰箱導(dǎo)致溫度不穩(wěn)定。

        8、 細胞凍存后應(yīng)取出一管復(fù)蘇，檢測細胞的存活率。理論上細胞可在液氮內(nèi)長期保存，為穩(wěn)妥起見可在細胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察細胞生長情況，再繼續(xù)凍存；

        9、 由于沒有使用凍存盒，在轉(zhuǎn)入液氮的過程中一定要對凍存管做好保冷措施，不能直接用手拿，可以用干冰或者少量液氮保護后轉(zhuǎn)移，操作過程注意安全；

        10、 轉(zhuǎn)移過程要快，避免凍存管暴露于常溫后融化；

        11、 若沒有液氮罐，存放在-80度冰箱的時候一定要放靠里面的位置，避免開關(guān)冰箱導(dǎo)致溫度不穩(wěn)定；

        二、細胞復(fù)蘇注意事項

        1、 水浴鍋的位置如果與液氮罐不是一個房間，需要對凍存管進行保冷后轉(zhuǎn)移到水浴鍋旁，避免路途細胞表面融化；

        2、 細胞溶解過程快速搖晃以加速溶解；

        3、 已溶解的凍存細胞盡量短時間的在常溫存放，盡快離心去除DMSO；

        4、 貼壁細胞復(fù)蘇24小時后觀察，若密度達到80%，則正常傳代；若密度不到80%則繼續(xù)培養(yǎng)到48小時再換液；

        5、 懸浮細胞復(fù)蘇3天內(nèi)不建議離心換液；

        6、 對DMSO不敏感的細胞在復(fù)蘇時也可不離心，減少操作步驟，也可降低污染的幾率。將解凍的細胞懸液直接轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加新鮮培養(yǎng)基，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。但培養(yǎng)12~24h后必須換新鮮的培養(yǎng)基，移除死細胞。

        好啦，那關(guān)于細胞冷凍與復(fù)蘇的注意事項我就講到這里啦，不同的冷凍方法和一些特殊細胞的冷凍步驟也有出入，本文給大家介紹的是比較通用適合大部分細胞凍存與復(fù)蘇的操作注意事項，如果您還有更多的操作技術(shù)問題或有細胞實驗外包和細胞質(zhì)粒購買的需求歡迎留言，普拉特澤生物細胞實驗平臺竭誠為您服務(wù)~

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