原位雜交實驗操作常見問題答疑
2022-05-30 14:56:34
來源/作者：普拉特澤-病理染色技術(shù)平臺
《原位雜交實驗操作常見問題答疑》由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享，本文從原位雜交操作的溫度、樣本、探針、實驗技術(shù)優(yōu)勢等方面來詳細分析解答。普拉特澤生物病理實驗平臺專業(yè)承接原位雜交等組織細胞的染色觀察、檢測服務(wù)，以專業(yè)的科研素養(yǎng)和豐富的實驗經(jīng)驗為廣大科研人員提供實驗服務(wù)。
上期我們講過了原位雜交實驗的介紹、步驟、注意事項，大家還記得嗎？不記得可以回去復(fù)習(xí)，鏈接奉上：
那現(xiàn)在，我們就來一個一個解答大家關(guān)于原位雜交的問題吧！
Qusetion1：怎樣保證FISH熒光原位雜交操作時的溫度呢？
答：有條件的情況下可以用熒光原位雜交的專用儀器進行操作。人工操作的話要注意：
(1)對熒光原位雜交操作過程中可能使用的一些儀器(如水浴鍋，孵箱進行溫控檢查，不符合要求的進行更換)。
(2)盡可能地保持環(huán)境溫度在20度以上。
(3)針對需要預(yù)熱以達到要求溫度的試劑，在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。
(4)同時檢測的樣本最好不超過4塊，操作中一定要迅速，實驗人員要注意一些小部件(諸如載玻片和蓋玻片)的溫度，尤其是在冬季。
Qusetion2：同一樣本可以多次進行熒光原位雜交嗎？
答：一般情況下，如果操作沒有得到理想的結(jié)果，是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進行反復(fù)雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。
Qusetion3：在實際熒光原位雜交操作中，那些因素比較重要?
答：實驗中最重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA/RNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度，所以探針要避光保存，其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬火劑封片目避光保存；各種試劑pH也要精確達到要求，這也直接關(guān)系到FISH的穩(wěn)定性。
Qusetion4：直標型探針和間標型探針有什么區(qū)別？
答：為什么我們要選擇直標型探針?所謂的直標型探針是指探針共價連接熒光表基團，間標型探針則是指DNA探針先與某個半抗原連接，諸如生物素或地高辛，然后半抗原與熒光素基團連接從而形成探針-半抗原-熒光素基團，類似“三明治”的復(fù)合物，與間標型探針相比，直標型探針具有低背景，高特異性的特點。隨著熒光染料和熒光檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，直標型探針的靈敏度也不斷提高。因而在熒光原位雜交(FISH)檢測領(lǐng)域，尤其是在疾病分型領(lǐng)域，探針大多采用直標型設(shè)計。
Qusetion5：FISH熒光原位雜交技術(shù)有什么主要優(yōu)勢呢?
答：（1）安全、快速、靈敏度高。
（2）探針穩(wěn)定，能較長時間保存。
（3）多色標記，簡單直觀。
（4）可用于中期染色體及間期細胞的分析。
（5）可應(yīng)用于新鮮、冷凍或石蠟包埋標本以及穿刺物和脫落細胞等多種物質(zhì)的檢測。
好啦，那關(guān)于原位雜交大家常問的問題就回答到這里啦，還有更多的需求可以給客服留言，技術(shù)會耐心解答，歡迎學(xué)術(shù)交流！有fish和原位雜交代做需求也可以隨時聯(lián)系我們哦，我們下個實驗見！
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