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    肝纖維化模型實驗步驟由普拉特澤生物動物實驗平臺為大家總結分享。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長期穩(wěn)定的肝纖維化實驗外包
本文給大家分享咱們技術長期總結下來的肝纖維化模型實驗步驟：
一、實驗準備

1. 材料準備

細胞：肝星狀細胞、肝細胞等

動物：小鼠、大鼠等

試劑：CCl4、TAA、TGF-β1等

儀器：顯微鏡、離心機、PCR儀等

2. 實驗設計

①確定研究目的和模型類型

②制定詳細的實驗方案和時間表

③準備實驗記錄表格

二、體外模型實驗步驟

1. 細胞培養(yǎng)

(1) 細胞復蘇

從液氮中取出凍存細胞

37℃水浴快速解凍

離心去除凍存液，重懸于培養(yǎng)基

(2) 細胞傳代

①棄去舊培養(yǎng)基

②PBS洗滌細胞

③加入胰酶消化

④離心收集細胞，按比例傳代

2. 細胞模型構建

(1) HSC激活模型

①接種HSC于培養(yǎng)板

②加入TGF-β1（5ng/mL）刺激

③培養(yǎng)48-72小時

(2) 共培養(yǎng)模型

①分別培養(yǎng)HSC和肝細胞

②按比例混合接種于Transwell小室

③共培養(yǎng)3-5天

3. 樣本收集與檢測

(1) 細胞形態(tài)觀察

①倒置顯微鏡觀察

②拍照記錄

(2) 蛋白檢測

裂解細胞提取蛋白

Western blot檢測α-SMA、Collagen I等

(3) RNA檢測

TRIzol法提取RNA

qPCR檢測纖維化相關基因
三、體內(nèi)模型實驗步驟

1. 動物準備

選擇6-8周齡小鼠

適應性飼養(yǎng)1周

隨機分組

2. 模型構建

(1) CCl4誘導模型

配制10%CCl4橄欖油溶液

腹腔注射，5μL/g體重

每周2次，持續(xù)4周

(2) TAA誘導模型

配制300mg/kg TAA溶液

腹腔注射，每周3次

持續(xù)6周

3. 樣本采集

(1) 血清采集

眼球取血或心臟穿刺

離心分離血清

-80℃保存

(2) 肝臟采集

⒈頸椎脫臼法處死小鼠

⒉取出肝臟

⒊部分固定于4%多聚甲醛

⒋部分凍存于液氮

5. 檢測分析

(1) 血清生化指標

ALT、AST檢測

羥脯氨酸含量測定

(2) 組織學檢查

石蠟包埋、切片

HE染色、天狼星紅染色

顯微鏡觀察并拍照

(3) 分子生物學檢測

⒈Western blot檢測纖維化標志物

⒉qPCR檢測相關基因表達

四、數(shù)據(jù)分析

1. 數(shù)據(jù)整理

整理實驗記錄

建立數(shù)據(jù)庫

2. 統(tǒng)計分析

使用GraphPad Prism等軟件

t檢驗或方差分析

p<0.05認為有統(tǒng)計學意義

3. 結果呈現(xiàn)

制作圖表

撰寫實驗報告

五、注意事項

1. 細胞實驗

嚴格無菌操作

控制細胞密度

注意細胞狀態(tài)

2. 動物實驗

遵守動物倫理規(guī)范

注意動物福利

準確記錄實驗數(shù)據(jù)

3. 安全防護

佩戴防護裝備

規(guī)范處理實驗廢物

注意化學品安全

六、常見問題及解決方案

1. 細胞污染

加強無菌操作

定期檢測支原體

2. 模型不穩(wěn)定

優(yōu)化誘導條件

增加樣本量

3. 數(shù)據(jù)偏差

⑴規(guī)范實驗操作

⑵設置重復實驗

肝纖維化模型的構建是一個系統(tǒng)的過程，需要研究人員具備扎實的理論基礎和熟練的實驗技能。通過嚴格遵循實驗步驟，不斷優(yōu)化實驗條件，才能獲得可靠的實驗結果，為肝纖維化研究提供有力支持。

本文詳細介紹了肝纖維化模型的實驗步驟，包括體外細胞模型和體內(nèi)動物模型的構建方法，涵蓋實驗準備、模型構建、樣本采集、檢測分析等全流程，為肝纖維化研究提供實用指南。

要資質(zhì)有資質(zhì)

要經(jīng)驗有經(jīng)驗

要案例有案例

好，肝纖維化模型實驗步驟就介紹到這里啦~

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