免疫組化實驗技術(shù)介紹【科研人入】
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的實驗就是免疫組化。免疫組化,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進行定位、定性及相對定量的研究。普拉特澤生物病理實驗平臺專業(yè)承接免疫組化實驗代做,提供優(yōu)質(zhì)、真實的病理檢測服務(wù)。
免疫組化技術(shù)的基本原理是利用抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的,因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來,以期達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性,定位或定量的研究。
那么為什么免疫組化我們用的這么多呢?它有哪些臨床上不可代替的作用呢:
(1)惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷;
(2)確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位;
(3)對某類腫瘤進行進一步的病理分型;
(4)軟組織腫瘤的治療一般需根據(jù)正確的組織學(xué)分類,因其種類多、組織形態(tài)相像,有時難以區(qū)分其組織來源,應(yīng)用多種標志進行免疫組化研究對軟組織腫瘤的診斷是不可缺少的;
(5)發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶,有助于臨床治療方案的確定,包括手術(shù)范圍的確定。
(6)為臨床提供治療方案的選擇。
免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等,這些常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下:
1. 免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)
將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶細胞化學(xué)技術(shù)
是免疫組織化學(xué)研究中最常用的技術(shù).基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進行定位或定性研究.
3. 免疫膠體金技術(shù)
就是用膠體金標記一抗,二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。
免疫組化實驗看似容易,但真想把它做好,還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經(jīng)驗。如果還有不懂的同學(xué)歡迎隨時留言,一起學(xué)習(xí)進步哦!