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        大家好！HE染色實(shí)驗(yàn)問題答疑由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享，文末附有HE染色視頻供大家學(xué)習(xí)。HE染色作為病理觀察最常見的染色實(shí)驗(yàn)，雖然普遍但新手村實(shí)驗(yàn)員們也總?cè)菀子懈鞣N稀奇古怪的問題，普拉特澤生物病理實(shí)驗(yàn)平臺(tái)今天就給大家統(tǒng)一回答！

        Q1：紅藍(lán)失調(diào)怎么辦？

        A：(1)偏藍(lán)色：蘇木素染色過深，分化不夠；伊紅試劑過期；伊紅染色時(shí)間太短，分化過度。

              (2)偏紅色：蘇木素染色過淺，分化過度；組織固定不佳，細(xì)胞核不著色；脫蠟不徹底，蘇木素染不上；蘇木素氧化成熟不夠；伊紅染色過深，分化不足。

        Q2：細(xì)胞核染色過淺，顏色暗淡怎么辦？

        A：造成這種情況的原因是切片在蘇木素染液中停留過短，或蘇木素過度氧化失效，或分化時(shí)間太長。

        解決辦法：重新染色。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液，每個(gè)3-5 min即可，接著重新染色。適當(dāng)增加組織的嗜堿性以增強(qiáng)核染色，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3 h，自來水沖洗5-10 min染色，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h，自來水沖洗10 min染色。

        Q3：染色時(shí)切片脫落的原因以及應(yīng)對(duì)措施

        A：(1)血栓、壞死或硬度較大的組織本身在染色時(shí)就極易脫落，應(yīng)小心操作。

              (2)組織脫水、透明不佳，石蠟未完全滲入，脫蠟時(shí)組織收縮，復(fù)水時(shí)組織又吸水膨脹，造成脫片；還可能是組織脫水、透明過度，且浸蠟溫度過高，導(dǎo)致組織變硬變脆，既不容易切片也極易在染色過程中脫片。對(duì)策：發(fā)脆發(fā)硬的組織可用棉簽蘸5%氨水或2%冰醋酸溶液涂抹在組織表面10-15秒。然后精修出組織面，放入冰水混合物中泡1 min，再切片。

              (3)切片太厚；切片破碎，不整齊；展片時(shí)水溫過低，展片不充分導(dǎo)致組織與玻片貼合不緊密；烤片時(shí)間和溫度過短過低，或過久過高，一般使用防脫玻片烤片僅需30 min即可。

               (4)染色前入水步驟不夠，組織吸水后快速膨脹，導(dǎo)致脫片;染色過程中漂洗粗暴，振蕩過度;反藍(lán)時(shí)間太久，反藍(lán)液堿性過強(qiáng)，可以采用自來水反藍(lán)，一般自來水PH7.5-7.8，效果很好。

               (5)1%鹽酸乙醇分化時(shí)脫片。分化的原理是利用鹽酸電離出的氫離子，改變組織表面電荷，使得吸附的染料脫落。由此看來，乙醇的作用并不大。并且分化液中的乙醇會(huì)使組織快速脫水而收縮，在隨后漂洗時(shí)組織又快速吸水膨脹，極易脫片。因此完全可以改用1%鹽酸水溶液作為分化液。

        Q4：成片的染色模糊不清，灰染

        A：(1)組織未及時(shí)固定，部分自溶;或固定不佳，深部組織未處理到。這種只能重新固定了。

              (2)盡管乙醇也是一種固定液，但盡量少用或不用，因?yàn)槠鋾?huì)導(dǎo)致組織發(fā)硬變脆，染色效果不好。

              (3)包埋時(shí)蠟的溫度過高，或切片后烤片時(shí)間和溫度過久過高都不好，可能會(huì)導(dǎo)致無法染色。

              (4)脫蠟不徹底；染料有問題;分化過度導(dǎo)致的顏色變淡，鏡下組織界限不清；染完后的脫水和透明不佳，水霧殘留在組織上。

              (5)通風(fēng)窗中(防止空氣中的水霧)，戴口罩操作封片(減少哈氣帶來的水霧)。

        Q5：不管怎么操作，始終無法染色或淡染

  A：這種情況一般因?yàn)榻M織固定時(shí)采用了酸性甲醛；或者組織在甲醛中浸泡時(shí)間太長；或者久置的甲醛變性分解為甲酸。

              補(bǔ)救：防患于未然，要么使用新鮮的中性甲醛固定，要么在存放的甲醛中加一點(diǎn)碳酸鈉中和甲酸。對(duì)于已經(jīng)固定的組 織可考慮再次固定；對(duì)于已經(jīng)制出的片子，染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時(shí)以上，然后自來水漂洗5min，可改善染色。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中，補(bǔ)充染色媒介，增強(qiáng)蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上，單純的蘇木素與組織的親和力很弱)。

        Q6：染色前烤片溫度、時(shí)間對(duì)HE染色的影響？

  A：肯定有影響。最佳時(shí)間是60℃，25min即可?？苫顒?dòng)至60-75℃，25-30min。

        Q7：可以把HE切片洗去做其他染色嗎？
  A：可以，這種情況一般適用于組織量較少，或較珍貴時(shí)操作。

        好啦，HE染色實(shí)驗(yàn)的問題答疑就解釋到這里啦！還有什么不明白的可以留言技術(shù)會(huì)一一詳細(xì)解釋的哦。想跟深入視頻學(xué)習(xí)的點(diǎn)擊：《HE染色理論+實(shí)操》