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        MTT法檢測細胞增殖由普拉特澤生物為大家總結分享，文末附上細胞常見實驗理論+實操視頻教程，供大家觀看學習。普拉特澤細胞實驗平臺專業(yè)提供細胞增殖檢測外包服務，積累了大量的細胞增殖檢測的經(jīng)驗與案例，今天就跟大家分享一下MTT法檢測細胞增殖的原理與步驟。

        首先是MTT法檢測細胞增殖的原理：

        MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍色的甲瓚結晶，甲瓚結晶的生成量僅與活細胞數(shù)目成正比。還原生成的甲瓚結晶可以用DMSO來溶解，利用酶標儀測定570 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。

        其次就是MTT檢測細胞增殖的詳細步驟：

        1.接種細胞：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.

        2.培養(yǎng)細胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)2-3天（可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間）。

        3.顯色：分別培養(yǎng)不同時間，每孔加MTT溶液（5mg/mL用PBS 配)20ul.繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內培養(yǎng)上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養(yǎng)上清液。每孔加150uL DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。

        4.比色：選擇570nm波長，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。

        結果：以時間為橫軸，光吸收值為縱軸繪制細胞生長曲線或計算細胞生長抑制率、細胞相對增殖率等。

        最后就是MTT法檢測細胞增殖的注意事項：

        1、培養(yǎng)好目的細胞

        將目的細胞培養(yǎng)好是一切細胞實驗的基礎。如果不知道如何培養(yǎng)細胞，可查看相關的文獻，不同細胞有各自的不同特點，可根據(jù)自己的實驗要求及培養(yǎng)經(jīng)驗適當調整。培養(yǎng)細胞的過程中，注意無菌操作，切記引起細胞污染。

        2、細胞鋪板

        將細胞培養(yǎng)一段時間后，大概了解細胞的增殖情況。根據(jù)細胞的生長情況反推鋪板時的細胞濃度。將消化后的細胞反復吹打，充分混勻盡量使細胞消化成單個細胞，計數(shù)再鋪板。此時，注意不要過分依賴細胞計數(shù)，因為細胞計數(shù)時，取樣量較多（10mL），存在細胞顆粒的不均勻分布會直接影響后期實驗，故掌握細胞計數(shù)，但細胞鋪板時不能完全依賴它。選擇適當?shù)募毎臃N濃度。

        3、避免血清干擾

        一般選小于10％的胎牛血清的培養(yǎng)液進行試驗。在呈色后盡量吸盡孔內殘余培養(yǎng)液。

        4、設空白對照

        與試驗平行不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照。其他試驗步驟保持一致，

        最后比色以空白調零。

        5、加MTT

        如果待檢測藥物有氧化還原性，則加MTT前換一次液或用PBS將細胞清洗一遍，防止待測藥物將MTT還原成棕褐色沉淀，影響實驗結果。注意，加入MTT溶液時，在避光條件下進行。

        6、MTT實驗吸光度最后要在0-0.7之間，超出這個范圍就不是直線關系。

        好啦，細胞增殖檢測MTT法我們就介紹完啦！細胞增殖檢測理論操作視頻點擊：《細胞實驗》，還有更多關于細胞增殖檢測技術問題咨詢或者代做細胞增殖檢測實驗的需求可以給我們留言，技術會一一回復~祝您實驗順利哦，我們下期見！