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        cck8法檢測細(xì)胞增殖法由普拉特澤生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)為大家總結(jié)分享，文末附上細(xì)胞增殖檢測的理論與實(shí)操視頻教程供大家學(xué)習(xí)。上兩篇咱們簡單學(xué)習(xí)了一下細(xì)胞增殖的介紹與檢測細(xì)胞增殖的七種方法，一直在普及細(xì)胞增殖檢測的理論知識(shí)，今天終于開始學(xué)習(xí)細(xì)胞增殖檢測的實(shí)操步驟啦。上兩篇理論鏈接奉上：
                                              細(xì)胞增殖檢測——什么是細(xì)胞增殖？
                                             細(xì)胞增殖檢測——細(xì)胞增殖檢測方法匯總

        今天，普拉特澤給大家分享的是細(xì)胞增殖檢測種最常用的檢測方法，cck8法檢測細(xì)胞增殖。Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。話不多說來上干貨吧：

        以cck8法檢測細(xì)胞的增殖能力為例：

        一、準(zhǔn)備cck8檢測細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)器材

        實(shí)驗(yàn)儀器：CO2恒溫培養(yǎng)箱、光學(xué)倒置顯微鏡、超凈工作臺(tái)、血球計(jì)數(shù)板

        實(shí)驗(yàn)試劑與耗材：DMEM/F12培養(yǎng)基、胎牛血清、胰酶、6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿、抗生素、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、CCK-8

        二、cck8檢測操作步驟

        1、細(xì)胞復(fù)蘇

        （1）將ddH2O預(yù)溫至37℃。

        （2）戴上手套和口罩帽子，從液氮罐中取出裝有目的細(xì)胞的凍存管，立即投入37℃ ddH2O中，輕搖凍存管使之在1分鐘內(nèi)快速溶解。

        （3）完全溶解后，75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后帶進(jìn)超凈臺(tái)。

        （4）在超凈臺(tái)中，在15 mL滅菌離心管中預(yù)先加入10 mL新鮮配制的培養(yǎng)基，打開凍存管，將所有凍融的細(xì)胞懸液加入該離心管中，常溫1000 rpm離心3分鐘，吸除上層的培養(yǎng)液。

        （5）1mL培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，輕輕吹打混勻后加入T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)基至5 mL，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

        （6）48小時(shí)后換液，細(xì)胞融合接近80%時(shí)即可傳代。

        2、細(xì)胞增殖待測細(xì)胞預(yù)處理

        細(xì)胞放在專用的培養(yǎng)基內(nèi)，在適宜待測細(xì)胞溫度濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

        3、 CCK-8檢測實(shí)驗(yàn)

        (1) 取生長狀態(tài)良好的各組細(xì)胞用0.25%胰酶消化后，細(xì)胞計(jì)數(shù)。

        (2) 將細(xì)胞種到96孔板中，密度為7000個(gè)細(xì)胞/孔。

        (3) 各組細(xì)胞在檢測時(shí)間點(diǎn)時(shí)，每孔加1/10體積 CCK-8，在37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時(shí)。

        (4)選擇450 nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。

        (5) 通過Gradpad軟件計(jì)算并繪制細(xì)胞增殖曲線圖。

        好了，cck8法檢測細(xì)胞增殖的想著操作步驟就介紹到這里啦，觀看視頻課程點(diǎn)擊：cck8檢測細(xì)胞增殖視頻教程，沒有看懂有疑問或者還有要補(bǔ)充操作流程的同學(xué)歡迎隨時(shí)留言，如果您需要細(xì)胞增殖檢測實(shí)驗(yàn)外包或待測的需求，歡迎選擇普拉特澤生物！