培養(yǎng)法檢測支原體操作步驟【支原體檢測外包】
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
支原體培養(yǎng)法檢測支原體操作步驟由普拉特澤生物表達(dá)檢測平臺分享,培養(yǎng)法檢測支原體非常經(jīng)典,準(zhǔn)確率高,得到界內(nèi)認(rèn)可。普拉特澤生物承接的多例支原體檢測外包實驗中,有部分周期不緊急的實驗會選擇培養(yǎng)法。
培養(yǎng)法為最為經(jīng)濟(jì)可靠的方法,但其實驗周期較長,所以常用來進(jìn)行對懷疑細(xì)胞的最后甄別。常用于細(xì)胞及臨床治療細(xì)胞的支原體檢查。
(一)材料與設(shè)備
1. 精氨酸肉湯培養(yǎng)基 按說明稱量粉劑,蒸餾水配制,高壓除菌(加20%胎牛血清)。
2. 支原體瓊脂培養(yǎng)基 按說明稱量粉劑,蒸餾水配制,高壓除菌(加20%胎牛血清)。
3. 其他 超凈工作臺、無菌吸管、試管架、培養(yǎng)試管/皿、37°C 培養(yǎng)箱。
(二)操作步驟
1. 樣品的儲存。樣品取材后,最好盡快進(jìn)行檢測。樣品如在24h 以內(nèi)進(jìn)行支原體檢測,可儲存在2~8℃; 如果超過24h 樣品應(yīng)放置于-20℃ 以下保存。-20℃保存的樣品,進(jìn)行檢測時需重新加入到對照培養(yǎng)細(xì)胞中,培養(yǎng)72h 后,取上清直接進(jìn)行接種檢測。
2. 準(zhǔn)備12支精氨酸肉湯培養(yǎng)基、支原體瓊脂培養(yǎng)基(半流體)。
3. 將樣品分別接種到10ml 精氨酸肉湯培養(yǎng)基、半流體培養(yǎng)基中(已冷卻至36℃) ,每支培養(yǎng)基接種樣品0.5~ 1.0ml, 每種樣品接種6 支精氨酸肉湯培養(yǎng)基,3 支半流體培養(yǎng)基。
4. 接種6d 后,取3 支精氨酸肉湯培養(yǎng)基中樣品0.5 ~ 1.0ml. 復(fù)種于精氨酸肉湯培養(yǎng)基中。
5. 36 ℃ 培養(yǎng)29d, 每隔3d 觀察一次。記錄實驗結(jié)果。
(三)結(jié)果判斷
培養(yǎng)結(jié)束時,精氨酸肉湯培養(yǎng)基分為6支接種,3支取出,3支復(fù)種。精氨酸肉湯培養(yǎng)基如有支原體生長,則液體顏色改變(粉色或黃色) 。
半流體培養(yǎng)基中如有支原體生長,則出現(xiàn)絮狀沉淀。
雖然用培養(yǎng)法檢測支原體準(zhǔn)確率非常高幾乎沒有失誤,但因為用培養(yǎng)法檢測支原體的準(zhǔn)確度非常高幾乎沒有失誤,雖然由于耗時長而不如簡單快速的PCR檢測法,但勝在經(jīng)濟(jì)便宜,因此大家可以學(xué)下來,經(jīng)費(fèi)不足的時候使用哦~如果您還有其他的技術(shù)問題或有支原體檢測外包的需求歡迎直接留言,普拉特澤隨時在線!