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一、M1和M2型巨噬細胞簡介

巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得，便于培養(yǎng)，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群，在條件適宜下可生活2－3周，多用做原代培養(yǎng)，難以長期生存。

巨噬細胞是一種位于組織內的白血球，源自單核細胞，而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內參與非特異性防衛(wèi)（先天性免疫）和特異性防衛(wèi)（細胞免疫）。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應。

南京醫(yī)科大學的楊碩教授報告了E3泛素連接酶Pellino3通過抑制TRAF6介導的泛素化和HIF1a的穩(wěn)定來負向調節(jié)巨噬細胞向M1極化以及IL-1β的產生，最終降低胰島素抵抗，阻止糖尿病發(fā)生的研究成果。值得注意的是，nature雜志最近發(fā)文證明了去除Treg細胞后可阻止衰老相關的肥胖、胰島素抵抗以及糖尿病的發(fā)生發(fā)展。因此，慢性炎癥在不同原因引起的二型糖尿病中的作用也可能是不一樣。

事實上，巨噬細胞極化還可參與腫瘤、感染性疾病以及組織的損傷和修復等生理病理過程。巨噬細胞在不同的微環(huán)境中可分化為M1型巨噬細胞和M2型巨噬細胞 。M1型巨噬細胞表達MHC II、CD80、CD86和 CD16/32，分泌TNF-α、IL-6和IL-12等促炎因子，以及CXCL9、CXCL10和CXCL11等趨化因子。另外，M2型巨噬細胞高表達arginase-1(Arg1)和CD206，分泌抗炎因子IL-10以及CCL2、CCL17和CCL22等趨化因子 。

二、腹腔中M1和M2型巨噬細胞流式染色實例

Mouse (腹腔貼壁細胞): M1和M2型巨噬細胞

1.標志物：M1: F4/80⁺CD11b⁺CD86⁺ cells；M2: F4/80⁺CD11b⁺CD206⁺cells；

2.流式細胞儀：Beckman Coulter，CytoFLEX；

3.流式抗體及用量：PE anti-mouse CD86(1μg/test，105007，BioLegend)；APC anti-mouse CD206 (0.5μg/test，141707，BioLegend)；PerCP-Cy5.5 anti-mouseCD11b (0.25μg/test，101227，BioLegend)； AF488 anti-mouse F4/80 (1μg/test，123119，BioLegend)；

4.染色條件：首先FcRblock孵育(1μg/test；101319；BioLegend)，4℃，5-10min； 接著F4/80、CD11b、CD86表面染色， 4℃，30min；

5.細胞固定：PBS洗滌細胞2~3次，加入細胞固定液（Fixation Buffer，500ul，420801，BioLegend）室溫避光固定30min。

6.細胞膜通透：150g離心5min棄掉固定液，加入2ml用ddH₂O 10倍稀釋后的10×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer（421002，BioLegend）重懸細胞，150g離心5min棄上清，重復步驟2~3次。

7.胞內染色：100μL1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer重懸細胞，加入CD206抗體（0.5μg/tests，141707，BioLegend），室溫避光孵育30min。孵育完畢后，2ml1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer洗滌細胞2~3次，加入500μL cell staining buffer重懸細胞，上機。

8.分析軟件：Flowjo (10.0.7)；

9.圈門策略及染色: (見下圖)。