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         今天普拉特澤生物跟大家一起學習的是——冰凍切片的操作步驟。冰凍切片的操作分享由普拉特澤生物病理實驗平臺技術總結分享，病理實驗平臺自成立承接組織冰凍切片外包實驗數(shù)百例，冰凍切片制作實操熟練、病理閱片分析專業(yè)，積累了多種動植物組織切片案例，歡迎各科研人員留言和技術們友好交流~

        冰凍切片操作步驟一：取材

        要進行冰凍切片觀察的組織，應盡可能采取新鮮的材料，防止組織發(fā)生死后變化，影響后期染色分析結果。

        冰凍切片的步驟二：速凍

        1、將取好的組織塊平放于軟塑瓶蓋或特制小盒內（直徑約2 cm）。

        2、如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒組織，將特制小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內。

        3、當盒底部接觸液氮時即開始氣化沸騰，此時小盒保持原位切勿浸入液氮中，大約10-20 s組織即迅速冰結成塊。

        4、再制成凍塊，使其可置入恒冷箱切片機冰凍切片。

        5、若需要保存，應快速以鋁箔或塑料薄膜封包，立即置入-80 ℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/span>

       冰凍切片的步驟三：固定

        1、樣品托上涂一層OCT包埋膠，將速凍組織置于其上，4℃冰箱預冷5-10 min讓OCT膠浸透組織。

        2、取下組織置于錫箔或者玻片上，樣品托速凍。

        3、組織置于樣品托上，其上再添一層OCT膠，以完全覆蓋為宜，速凍架（PE）上30 min。

        冰凍切片的步驟四：切片

        1、恒溫冰凍切片機為較理想的冰凍切片機，其基本結構是將切片機置于低溫密閉室內，故切片時不受外界溫度和環(huán)境影響，可連續(xù)切薄片至5-10 μm。

        2、切片時，低溫室內溫度以-15℃ ~ -20℃為宜，溫度過低組織易破碎，抗卷板的位置及角度要適當，載玻片附貼組織切片，切勿上下移動。

        3、切好后，室溫放置30 min后，入4℃丙酮固定5-10 min，烘箱干燥20 min。PBS洗5 min×3。

        4、進行抗原熱修復，微波熱修復也可，室溫自然冷卻?？捎?/span>3%H2O2孵育5-10 min，消除內源性過氧化物酶的活性

   好了，冰凍切片的實驗步驟我們就講完了，想學習冰凍切片制作的、對冰凍切片步驟有疑問的、需要普拉特澤生物代做冰凍切片的同學歡迎留言哦~