ELISA原理、操作以及注意事項(xiàng)
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
普拉特澤生物繼續(xù)跟大家一起學(xué)習(xí)新的實(shí)驗(yàn)——ELISA實(shí)驗(yàn)。在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域,ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))已成為一種不可或缺的技術(shù)手段,普拉特澤生物表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)可承接各種表達(dá)檢測(cè)外包服務(wù),包括檢測(cè)ELISA、Western Blot、DNA甲基化等實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)。
本文將為科研小白詳細(xì)解析ELISA的原理、操作步驟以及注意事項(xiàng),讓小白們輕松掌握這一實(shí)驗(yàn)技能。
(一)ELISA原理簡(jiǎn)介
ELISA,即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合的免疫分析技術(shù)。其基本原理是利用酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)樣本中的相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合,通過酶催化底物顯色反應(yīng)來檢測(cè)待測(cè)物質(zhì)的含量。
ELISA
二、ELISA操作步驟
[1]樣本處理:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尰蛱幚?,以便后續(xù)操作。
[2]抗原或抗體包被:將抗原或抗體包被在固相載體(如微孔板)上,形成固相抗原或抗體。
[3]加入待測(cè)樣本:將待測(cè)樣本加入包被好的微孔中,與固相抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。
[4]加入酶標(biāo)抗體:加入酶標(biāo)記的抗體或抗原,與待測(cè)樣本中的抗原或抗體結(jié)合,形成酶標(biāo)復(fù)合物。
[5]洗滌:去除未結(jié)合的干擾物質(zhì),以提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
[6]顯色反應(yīng):加入底物,酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng),形成有色產(chǎn)物。
[7]結(jié)果判定:通過測(cè)量有色產(chǎn)物的吸光度,與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照,計(jì)算待測(cè)樣本中抗原或抗體的含量。
ELISA實(shí)驗(yàn)流程
三、注意事項(xiàng)
Ⅰ.實(shí)驗(yàn)環(huán)境:保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔,避免污染。實(shí)驗(yàn)過程中要佩戴手套,避免直接接觸樣本和試劑。
Ⅱ.試劑保存:試劑應(yīng)保存在干燥、陰涼、避光的環(huán)境中,避免受潮和高溫。
Ⅲ.樣本處理:樣本處理過程中要注意避免交叉污染,確保樣本的準(zhǔn)確性和可靠性。
Ⅳ.實(shí)驗(yàn)操作:實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行,避免誤操作導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
Ⅴ.結(jié)果解讀:實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行解讀,避免主觀臆斷導(dǎo)致誤判。
ELISA樣本檢測(cè)結(jié)果圖
四、總結(jié)
通過本文的詳細(xì)介紹,相信您對(duì)ELISA的原理、操作步驟以及注意事項(xiàng)有了更深入的了解。在實(shí)際操作過程中,要注意實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔、試劑的保存、樣本的處理以及實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。希望本文能為您在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)工作提供有益的幫助。
好,ELISA原理、操作以及注意事項(xiàng)就介紹到這里啦~
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