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  FISH染色實驗步驟由普拉特澤生物為大家總結分享，普拉特澤生物長期承接各種科研實驗項目，積累大量的實操經驗，本文就來給大家分享一FISH 染色的實驗步驟

一、實驗步驟

    1.切片脫蠟水化。

    
    2.通透
    a.【1×PBS】清洗5 min；b.加入預冷的【通透液】（含0.5%TritonX-100的PBS），4°C靜置5 min；c.棄去【通透液】后，加入【1×PBS】清洗5 min，3次。

    
    3.探針檢測
    a.加入200 uL【預雜交液】，37°C封閉30 min；（預雜交液：將適量Blocking Solution與Pre-hybridization buffer按照1：99混勻后，37℃孵育至透明澄清狀態(tài)（約30 min）后，分裝保存。在使用前，須在37℃氣浴或水浴中孵育至澄清透明。）

    b.預雜交同時，將【雜交液】在37°C中預熱；1）c.避光條件下，把2.5 uL探針加入到100μl【雜交液】中；注：探針濃度可根據具體實驗情況進行優(yōu)化。雜交液配制：將適量BlockingSolution與HybridizationBuffer按照1：99混勻，37℃孵育30 min后分裝保存。在使用前，須先在37℃氣浴或水浴中孵育30 min。雜交液顏色偏黃屬于正?，F(xiàn)象。

    注：Pre-hybridizationBuffer（試劑A）和HybridizationBuffer（試劑B）從低溫取出時可能有沉淀析出，屬于正常現(xiàn)象。

    d.棄去切片中的【預雜交液】，加入100uL含有探針的【探針雜交液】，避光，37°C雜交過夜。

    e.避光，42°C，【雜交洗液I】清洗3次，每次5 min，以降低背景信號；

    f.避光，42°C，【雜交洗液II】清洗1次；g.避光，42°C，【雜交洗液III】清洗1次；h.避光，【1XPBS】清洗，室溫5 min。注：所有指定溫度的步驟，注意將相關試劑預熱到對應實驗所需溫度后再使用。
    
    4.(如組織有自發(fā)熒光，可增加步驟蘇丹黑自發(fā)熒光淬滅劑進行淬滅。）

    5.封片避光條件下，滴加封片劑用蓋玻片密封，進行熒光檢測。

 
 二、實驗結論

   DAPI染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽性表達為相應熒光素標記其他顏色熒光。陽性結果可對比陰性對照結果來進行判別。

這期FISH染色實驗就到這里結束啦，所以如果您有FISH染色的實驗的需求歡迎隨時咨詢普拉特澤生物~或者可與我們技術老師直接聯(lián)系哦:18570028002（微信同號）