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        大家好，今天跟大家一起學(xué)習(xí)的是HE染色實(shí)驗(yàn)操作步驟。HE染色是石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一，普拉特澤生物病理實(shí)驗(yàn)平臺承接最多、最普遍的實(shí)驗(yàn)，也是我們實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作最多，最熟練的染色技術(shù)之一。本文我們就一起來看看，HE染色到底怎樣操作才能得到一個(gè)漂亮的染色結(jié)果。

        一、實(shí)驗(yàn)試劑材料

        多聚甲醛、酒精、二甲苯、石蠟、蘇木精水溶液、伊紅染色液、生理鹽水、蒸餾水、PBS等實(shí)驗(yàn)必備溶劑

        二、實(shí)驗(yàn)步驟

        （1）HE染色組織固定與切片：首先將組織樣本進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋。在模具中加入液態(tài)石蠟，將待包埋的組織樣本放入石蠟中，確保組織位置規(guī)整。補(bǔ)充少許液態(tài)的石蠟后，進(jìn)行降溫冷凍，使石蠟變?yōu)楣虘B(tài)達(dá)到組織固定的效果，然后使用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片，厚度在4-8um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。

        （2）HE染色樣本脫蠟：將待測組織樣本切片放于二甲苯中，充分浸泡10 min，浸泡完后更換二甲苯繼續(xù)浸泡10 min，目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解，這樣可以在進(jìn)行染液染色的時(shí)候，染液可以充分進(jìn)入組織中，同時(shí)，二甲苯還可以起到透明的作用，使切片更容易觀察。

        （3）HE染色樣本水化：將浸泡過二甲苯的待測組織樣本先放入無水乙醇中浸泡5min，使脫蠟時(shí)用的二甲苯可以被洗脫出去，使水可以進(jìn)入組織中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡5 min以達(dá)到充分水化的效果。

        （4）HE染色切片蘇木素染色、分化與反藍(lán)：將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡5 min，總共清洗3次。之后用移液槍吸取已經(jīng)預(yù)先配制好的蘇木素染色液，每個(gè)組織切片滴加100 ul，充分染色10 min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進(jìn)行分化，使細(xì)胞核中結(jié)合過多的染液和細(xì)胞漿中的多余的染液被除去。分化完成后，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。為了使蘇木素染藍(lán)色，使用弱堿性的促藍(lán)液加入組織切片中，讓細(xì)胞核染藍(lán)色。反藍(lán)結(jié)束后先用清水進(jìn)行清洗，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。

        （5）HE染色切片伊紅染色與脫水：向上一步驟的組織樣本切片中加入伊紅染液，并使組織可以充分染色3 min，染色完畢后，再將組織切片進(jìn)行梯度脫水，分別使用濃度為80%、95%以及無水乙醇進(jìn)行操作。80%的乙醇脫水5s，95%乙醇脫水2 min，無水乙醇脫水2 min。

        （6）HE染色樣本切片風(fēng)干封片：將脫水后的組織樣本切片使用二甲苯浸泡2次，每次持續(xù)4 min，然后將組織樣本切片干，并使用中性樹膠封片。

        （7）最后在顯微鏡下觀察并拍照

        好咧，那關(guān)于HE染色的操作步驟就講解完啦，不懂的點(diǎn)擊《HE染色理論+實(shí)操》學(xué)習(xí)，還有其他疑問的話歡迎留言，技術(shù)會耐心回復(fù)的哦。如果您需要HE染色外包或HE染色代做服務(wù)，普拉特澤生物隨時(shí)在線~