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        大家好，今天繼續(xù)跟普拉特澤生物一起學(xué)習(xí)巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的——巨噬細(xì)胞極化實(shí)驗(yàn)。巨噬細(xì)胞功能極化對(duì)機(jī)體抗病原菌感染及損傷修復(fù)的質(zhì)量和效率具有重要作用，巨噬細(xì)胞功能極化對(duì)機(jī)體抗病原菌感染及損傷修復(fù)的質(zhì)量和效率具有重要作用。巨噬細(xì)胞的分型、極化實(shí)驗(yàn)都具有較高的實(shí)驗(yàn)門檻，也很受到國(guó)自然項(xiàng)目的支持，因此很受各位科研人員的喜愛(ài)，普拉特澤生物流式檢測(cè)平臺(tái)專業(yè)為大家提供巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，一起來(lái)看看步驟吧！

        免疫效應(yīng)細(xì)胞在免疫反應(yīng)中并非是表型單一的活化細(xì)胞，在局部微環(huán)境因素的影響下，活化的細(xì)胞分化成具有不同表型的亞細(xì)胞型。這些亞型細(xì)胞適應(yīng)局部環(huán)境同時(shí)又是局部環(huán)境不可或缺的組份。它們分布不同，表型特征有別:表達(dá)不同的表面分子，分泌不同細(xì)胞因子，功能也不同。典型的例子是Th細(xì)胞的極化，而近年來(lái)人們逐漸發(fā)現(xiàn)活化巨噬細(xì)胞有類似現(xiàn)象，成熟巨噬細(xì)胞能在各種因素誘導(dǎo)下出現(xiàn)表型和功能分化，即極化現(xiàn)象。

        1、原代巨噬細(xì)胞的獲?。?/span>

        （1）處死小鼠，用取骨鑷和手術(shù)剪。剪開小鼠皮膚，取小鼠兩條后腿并剔除骨上的肌肉，然后浸泡在含1%雙抗的PBS中。

        （2）在小鼠腿骨的一段剪一個(gè)小口，然后用5mL含1%雙抗的PBS沖洗骨髓細(xì)胞。用1mL槍尖吸取沖洗的細(xì)胞液，100目濾膜過(guò)濾到新的離心管。然后300 xg ，離心5分鐘，去上清液。

        （3）用1-5 mL紅細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞，冰上裂解5 min（期間適當(dāng)震蕩一下），300 xg 離心5分鐘去上清液。再用PBS清洗一次，并計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目，取1*106個(gè)細(xì)胞鋪6孔板每孔。

        （4）用RMPI-1640完全培養(yǎng)基（10%胎牛血清，100x雙抗，M-CSF：10 ng/mL，1:10000稀釋原液）中培養(yǎng)。每?jī)商鞊Q一次液，培養(yǎng)一周后誘導(dǎo)出巨噬細(xì)胞。采用CD11b、F4/80流式抗體進(jìn)行染色驗(yàn)證。

        2、巨噬細(xì)胞極化實(shí)驗(yàn)：

        （1）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，狀態(tài)較好細(xì)胞（原代巨噬細(xì)胞或者RAW264.7細(xì)胞株）鋪板每孔1*106個(gè)細(xì)胞。

        （2）加入LPS（100ng/mL）、INF-γ（40ng/mL）誘導(dǎo)為M1型巨噬細(xì)胞；加入IL-4（100ng/mL）誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞。細(xì)胞因子同培養(yǎng)基一起加入。

        （3）誘導(dǎo)12小時(shí)后。收集細(xì)胞，提RNA，RT-PCR檢測(cè)M1型關(guān)鍵標(biāo)志物：TNF-a、iNOS；M2型標(biāo)志物Arg-1的基因表達(dá)水平。

        （4）或者收集細(xì)胞后，流式抗體染色M1型（染色抗體：CD11b、F4/80、CD86）；M2型巨噬細(xì)胞（抗體CD11b、F4/80、CD206）流式上機(jī)檢測(cè)。

        那誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化實(shí)驗(yàn)介紹與步驟就說(shuō)到這里啦，如果您對(duì)巨噬細(xì)胞還有更多的疑問(wèn)研究或有巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包得需求，歡迎隨時(shí)咨詢，普拉特澤生物一直在線的哦~