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        巨噬細(xì)胞流式檢測方法由普拉特澤生物流式檢測平臺為大家分享。巨噬細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的一種特殊的、長壽命的吞噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞是三種吞噬細(xì)胞類型之一，還有粒細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞）和樹突狀細(xì)胞（DCs）。

        一般來說，巨噬細(xì)胞可根據(jù)其功能和活化程度分為兩個亞型：經(jīng)典激活的M1巨噬細(xì)胞和交替激活的M2巨噬細(xì)胞；極化的這種性質(zhì)表示頻譜的相對兩端，僅指在給定的時間和位置上的激活。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了M1巨噬細(xì)胞具有與對細(xì)菌和細(xì)胞內(nèi)病原體的免疫反應(yīng)相關(guān)的促炎作用。另一方面，M2具有更多的抗炎作用，在血管生成和傷口愈合中具有相關(guān)功能。M2還與2型T輔助反應(yīng)（Th2）有關(guān)，例如蠕蟲免疫、哮喘和過敏。

        M1型巨噬細(xì)胞表達MHC II、CD80、CD86和 CD16/32，分泌TNF-α、IL-6和IL-12等促炎因子，以及CXCL9、CXCL10和CXCL11等趨化因子。另外，M2型巨噬細(xì)胞高表達arginase-1(Arg1)和CD206，分泌抗炎因子IL-10以及CCL2、CCL17和CCL22等趨化因子(如下圖)。

        （文中部分內(nèi)容摘自賽默飛 賽默飛生命科學(xué)）

        腹腔中M1和M2型巨噬細(xì)胞流式染色實例

        Mouse (腹腔貼壁細(xì)胞): M1和M2型巨噬細(xì)胞

        1.標(biāo)志物：

        M1: F4/80+CD11b+CD86+ cells；M2: F4/80+CD11b+CD206+cells；

        2. 流式細(xì)胞儀：Beckman Coulter，CytoFLEX；

        3.流式抗體及用量：

        PE anti-mouse CD86 (1μg/test，105007，BioLegend)；APC anti-mouse CD206 (0.5μg/test，141707，BioLegend)；PerCP-Cy5.5 anti-mouseCD11b (0.25μg/test，101227，BioLegend)；

        AF488 anti-mouse F4/80 (1μg/test，123119，BioLegend)；

        4.染色條件：首先FcRblock孵育(1μg/test；101319；BioLegend)，4℃，5-10min； 接著F4/80、CD11b、CD86表面染色， 4℃，30min；

        5.細(xì)胞固定：PBS洗滌細(xì)胞2~3次，加入細(xì)胞固定液（Fixation Buffer，500ul，420801，BioLegend）室溫避光固定30min。

        6.細(xì)胞膜通透：150g離心5min棄掉固定液，加入2ml用ddH2O 10倍稀釋后的10×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer（421002，BioLegend）重懸細(xì)胞，150g離心5min棄上清，重復(fù)步驟2~3次。

        7.胞內(nèi)染色：100μL1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer重懸細(xì)胞，加入CD206抗體（0.5μg/tests，141707，BioLegend），室溫避光孵育30min。孵育完畢后，2ml1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer洗滌細(xì)胞2~3次，加入500μL cell staining buffer重懸細(xì)胞，上機。

        8.分析軟件：Flowjo (10.0.7)；

        9. 圈門策略及染色: (見下圖)。

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