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        免疫組化/IHC實驗操作步驟由普拉特澤生物旗下科研培訓(xùn)品牌——春風(fēng)學(xué)院為大家總結(jié)分享。普拉特澤病理實驗平臺承接免疫組化/IHC幾百例，動植物各部位切片都有實操的經(jīng)驗，在廣大科研小白的技術(shù)咨詢中我們終于總結(jié)了這篇免疫組化的注意事項出來供大家參考學(xué)習(xí)。

        1、切片固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。對干冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍好，但對干不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。有時候商品化的抗體會有比較適合的固定液，使用前請注意查看說明書。

        2、組織脫水，透明：時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整

        3、切片時展片：有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當(dāng)?shù)卦谒屑尤霂椎我掖肌?/span>

        4、烤片：60℃30分鐘或37℃過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。

        5、蠟塊及切片的保存：最好在4℃保存

        6、脫片問題：多聚賴氨酸為目前免疫組化染色工作中最常用的一種防脫片劑，6ml的多聚賴氨酸溶液可按1:10稀釋成60ml的工作液，適合于需要酶消化，微波，高溫高壓的防脫片處理。7、滅活內(nèi)源性酶：HRP系統(tǒng):3%雙氧水滅活;AP系統(tǒng):3%HAc滅活

        7、暴霞抗原：對于石蠟切片的免疫組化實驗時，必須采用高溫加熱抗原修復(fù)，這將有助于暴露抗原決定簇，從而增加免疫組化染色的強(qiáng)度(不同抗體的最佳修復(fù)液請參閱抗體說明書)。對于不同的組織，不同的抗原，不同的抗體，所采用的方法應(yīng)不一樣，可進(jìn)行熱修復(fù)、胰酶消化、既不修復(fù)也不消化。膠原還可以用胃蛋白酶消化等。

        8、封閉：在山羊血清封閉，非特異性染色仍然較強(qiáng)時，可延長封閉時間或用濃縮血清封閉。

        9、抗體稀釋：應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”的原則，對于PBS稀釋的抗體一定要當(dāng)天使用。

        10、背景高：在抗體濃度、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含1%Tween20的PBS洗，特別是在顯色之前要多洗。

        11、返藍(lán)：在蘇木精復(fù)染后，可用堿性緩沖液(如PBS)或Na2HPOA的飽和溶液

        返藍(lán)。

        12、顯色：一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。

        13、在整個操作過程中，切片千萬不能干燥，否則會有非特異性染色。

        好啦，那免疫組化/IHC的注意事項咱們就總結(jié)到這里啦，想更進(jìn)一步學(xué)習(xí)免疫組化的技術(shù)可以點擊《免疫組化/IHC 理論+實操》跟著視頻學(xué)習(xí)文獻(xiàn)與操作。如果有同學(xué)需要免疫組化代做與外包的同學(xué)歡迎留言，認(rèn)準(zhǔn)普拉特澤哦。