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    前兩篇我們總結(jié)了MCD飲食模型 vs 高脂飲食模型、非酒精性脂肪肝（NAFLD）動(dòng)物模型評(píng)價(jià)指標(biāo)等常見問題，今天來學(xué)習(xí)如何選擇NAFLD/NASH動(dòng)物模型——關(guān)鍵評(píng)價(jià)指標(biāo)與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)全指南希望大家引以為鑒，能夠避免這些普拉特澤為大家踩過的坑。

上篇：MCD飲食模型 vs 高脂飲食模型：非酒精性脂肪肝模型病理指標(biāo)對(duì)比分析

下篇：非酒精性脂肪肝（NAFLD）動(dòng)物模型評(píng)價(jià)指標(biāo)

鏈接奉上，大家快點(diǎn)踩著普拉特澤生物的肩膀去摘蘋果吧！那現(xiàn)在我們來接著進(jìn)入今天的話題：

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)及其進(jìn)展型非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的研究已成為肝臟疾病領(lǐng)域的重點(diǎn)，而選擇合適的動(dòng)物模型是研究成功的關(guān)鍵第一步。
本文將全面解析NAFLD/NASH模型的分類體系、選擇策略、關(guān)鍵評(píng)價(jià)指標(biāo)以及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要點(diǎn)，幫助研究者建立高效可靠的研究方案。

1）NAFLD/NASH模型分類及選擇策略

1. 飲食誘導(dǎo)模型：模擬人類代謝特征

▲高脂飲食(HFD)模型：

造模時(shí)間：16-24周可誘導(dǎo)單純脂肪變性，32周以上出現(xiàn)NASH特征

優(yōu)點(diǎn)：最接近人類代謝綜合征特征

缺點(diǎn)：纖維化進(jìn)展緩慢，需結(jié)合其他刺激

▲蛋氨酸膽堿缺乏(MCD)模型：

造模時(shí)間：4-8周即可形成顯著NASH

優(yōu)點(diǎn)：造模周期短，炎癥和纖維化明顯

缺點(diǎn)：伴隨體重下降，與人類代謝特征不符

▲高脂高果糖高膽固醇(HFHFrHC)模型：

造模時(shí)間：20-30周形成典型NASH伴纖維化

優(yōu)點(diǎn)：最接近人類飲食結(jié)構(gòu)

缺點(diǎn)：成本高，周期長

2） 基因修飾模型：研究特定通路機(jī)制

ob/ob和db/db小鼠：

特征：自發(fā)肥胖和胰島素抵抗

適用：早期NAFLD研究

局限：單獨(dú)使用難以形成顯著NASH和纖維化

MAT1A-KO小鼠：

特征：自發(fā)肝脂肪變性和氧化應(yīng)激

優(yōu)勢(shì)：研究氧化應(yīng)激在NASH中的作用

造模時(shí)間：6個(gè)月出現(xiàn)纖維化

3）復(fù)合模型：加速疾病進(jìn)展

▲STAM模型：

方法：新生期鏈脲佐菌素注射+HFD喂養(yǎng)

特點(diǎn)：16周內(nèi)完成脂肪變性-NASH-肝細(xì)胞癌全過程

應(yīng)用：抗癌藥物篩選

▲DIAMOND小鼠：

特征：高脂高果糖飲食誘導(dǎo)

優(yōu)勢(shì)：高度模擬人類NASH組織學(xué)特征

評(píng)價(jià)：目前最接近人類NASH的模型之一

3）模型選擇的關(guān)鍵考量因素

1. 研究目的導(dǎo)向選擇

機(jī)制研究：

早期NAFLD：ob/ob小鼠+HFD(8-12周)

炎癥機(jī)制：MCD模型(4-6周)

纖維化研究：HFHFrHC模型(24-30周)

藥物開發(fā)：

抗炎藥物：MCD模型

抗纖維化藥物：CCL4+HFD復(fù)合模型

代謝調(diào)節(jié)藥物：DIAMOND小鼠

2. 種屬差異考量

小鼠模型：

優(yōu)點(diǎn)：成本低，基因工具豐富

缺點(diǎn)：肝臟生理與人類存在差異

3.大鼠模型：

優(yōu)勢(shì)：采血量多，更適合長期研究

代表：Zucker fatty大鼠

非人靈長類：

價(jià)值：最接近人類生理

局限：倫理和成本問題

4）NAFLD/NASH關(guān)鍵評(píng)價(jià)指標(biāo)體系

1. 基礎(chǔ)表型評(píng)價(jià)

代謝參數(shù)：

體重增長曲線

空腹血糖和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)

血清脂質(zhì)譜(TC、TG、LDL-C/HDL-C)

肝功能指標(biāo)：

ALT/AST比值

ALP和GGT水平

血清白蛋白和膽紅素

2. 組織學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

NAFLD活動(dòng)度評(píng)分(NAS)：

脂肪變性(0-3分

小葉炎癥(0-3分)

肝細(xì)胞氣球樣變(0-2分)

診斷閾值：NAS≥5分可診斷NASH

纖維化分期：

天狼星紅染色定量分析

Ishak或METAVIR評(píng)分系統(tǒng)

α-SMA免疫組化(肝星狀細(xì)胞活化)

3. 分子標(biāo)志物分析

炎癥相關(guān)：

TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表達(dá)

F4/80免疫染色(巨噬細(xì)胞浸潤)

CCR2+單核細(xì)胞流式分析

纖維化相關(guān)：

Collagen I/III、α-SMA mRNA

TIMP-1/MMP-2比值

TGF-β/Smad通路蛋白

代謝相關(guān)：

SREBP-1c/FASN(脂肪合成)

PPARα/CPT1(脂肪酸氧化)

IRS-1/PI3K/Akt(胰島素信號(hào))

5）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的核心要點(diǎn)

1. 標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

樣本采集：

固定時(shí)間點(diǎn)(上午8-10點(diǎn))

禁食處理(6小時(shí))

肝臟分區(qū)域取樣(左葉/右葉)

組織處理：

OCT包埋(冰凍切片)

4%多聚甲醛固定(石蠟切片)

速凍保存(-80℃)

2. 質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)

模型驗(yàn)證：

設(shè)立中間時(shí)間點(diǎn)(如4、8、12周)

預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳干預(yù)窗口

病理學(xué)雙盲評(píng)估

數(shù)據(jù)分析：

代謝籠監(jiān)測(cè)能量消耗

Micro-CT評(píng)估體脂分布

高通量測(cè)序數(shù)據(jù)驗(yàn)證

3. 轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)考量

臨床相關(guān)性：

選擇與人類NASH組織學(xué)相似的模型

關(guān)注臨床可檢測(cè)的生物標(biāo)志物

考慮性別差異(雄性更易造模)

藥物測(cè)試規(guī)范：

設(shè)立預(yù)防性和治療性給藥組

監(jiān)測(cè)藥物對(duì)代謝參數(shù)的影響

多時(shí)間點(diǎn)動(dòng)態(tài)評(píng)估療效

6）常見問題解決方案

1. 造模失敗排查

脂肪變性不明顯：

檢查飼料儲(chǔ)存條件(避免氧化)

確認(rèn)動(dòng)物品系敏感性

延長造模時(shí)間

炎癥反應(yīng)不足：

增加飲食中膽固醇含量(1-2%)

結(jié)合低劑量CCL4刺激

改用MCD或HFHFrHC飲食

2. 數(shù)據(jù)變異控制

組內(nèi)差異大：

嚴(yán)格統(tǒng)一動(dòng)物周齡(±3天)

控制飼養(yǎng)環(huán)境(溫度、光照周期)

同批次飼料喂養(yǎng)

病理評(píng)分不一致：

采用數(shù)字化病理分析系統(tǒng)

至少兩位病理學(xué)家雙盲評(píng)分

建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

7）前沿模型發(fā)展方向

1. 類器官與微生理系統(tǒng)

肝臟類器官模型：

3D培養(yǎng)技術(shù)

患者來源個(gè)性化模型

藥物毒性測(cè)試應(yīng)用

器官芯片技術(shù)：

模擬肝臟微環(huán)境

多器官相互作用研究

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞反應(yīng)

2. 基因編輯新模型

CRISPR-Cas9定制模型：

特定基因突變引入

人類疾病等位基因敲入

條件性基因表達(dá)調(diào)控

人源化肝臟小鼠：

FRG小鼠模型

嵌合肝研究平臺(tái)

人類病原體感染研究

結(jié)論：建立標(biāo)準(zhǔn)化研究范式

選擇合適的NAFLD/NASH動(dòng)物模型需要綜合考慮研究目的、疾病階段、種屬特點(diǎn)和轉(zhuǎn)化價(jià)值。建議研究者：

①根據(jù)科學(xué)問題選擇最匹配的模型系統(tǒng)

②建立多層次評(píng)價(jià)指標(biāo)體系

③實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)化操作流程和質(zhì)量控制

關(guān)注模型與人類疾病的臨床相關(guān)性

通過系統(tǒng)化的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑u(píng)價(jià)方法，可顯著提高NAFLD/NASH研究的可靠性和轉(zhuǎn)化潛力，為開發(fā)新型治療策略提供堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

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