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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子（如DNA，RNA等）導(dǎo)入（真核） 細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。

除轉(zhuǎn)染以外，關(guān)于基因片段轉(zhuǎn)移的方法還有很多，像轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)導(dǎo)，感染等，為了避免混淆，更好地區(qū)分這些概念，我們做了一個小總結(jié)。

   轉(zhuǎn)染（Transfection）：指重組質(zhì)粒載體或游離核苷酸在脂質(zhì)體等介導(dǎo)下進(jìn)入真核細(xì)胞。

   轉(zhuǎn)化（Transformation）：指含外源基因的重組質(zhì)粒（載體）將外源基因直接導(dǎo)入原核細(xì)胞（如細(xì)菌），使之獲得新的遺傳特性。

   轉(zhuǎn)導(dǎo)（Transduction）：指通過重組病毒載體將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞或原核細(xì)胞，從而引起的基因重組現(xiàn)象。

   感染（Infecion）：重組病毒載體入侵受體細(xì)胞導(dǎo)致的病理生理過程。

言歸正傳，還是要說到我們今天的主角——細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,通常只持續(xù)幾天，在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)分析結(jié)果，多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染指外緣DNA既可以整合到宿主染色體中。通常需要通過一些選擇性標(biāo)記來篩選以得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。根據(jù)轉(zhuǎn)染方法可以分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)。

我們常用的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法有電穿孔法、顯微注射、基因槍、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，磷酸鈣共沉淀法、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。

不同的轉(zhuǎn)染方法有不同的特點(diǎn)，在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件（包括已有設(shè)備）確定最佳轉(zhuǎn)染方法，我們?yōu)榇蠹铱偨Y(jié)了一些常用轉(zhuǎn)染方法的特點(diǎn)及適用細(xì)胞范圍：

顯微注射：最精確，成本最高；

磷酸鈣法：最樸實(shí)，成本最低；

脂質(zhì)體/聚合物法：最常規(guī)，工具細(xì)胞最佳選擇，但不一定所有細(xì)胞都適合；

電轉(zhuǎn)法：非工具細(xì)胞最佳選擇，常用于難轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)染效率低的細(xì)胞系或者建立篩選細(xì)胞株，關(guān)鍵是要有儀器-點(diǎn)轉(zhuǎn)移。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染做的好不好除了受轉(zhuǎn)染方法的影響外，還有很多別的影響因素，像細(xì)胞狀態(tài)和密度、培養(yǎng)基、載體大小等多方面因素都會影響到我們最后的轉(zhuǎn)染效率，所以細(xì)胞轉(zhuǎn)染是一個常見但是卻并不簡單的實(shí)驗(yàn)，盡管如此，我們還是要努力追求最理想的細(xì)胞轉(zhuǎn)染原則——轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小、重復(fù)性好、安全、方法簡單、省時、經(jīng)濟(jì)。因此，我們技術(shù)部的老師們特別提醒大家留心以下注意事項(xiàng)：

1、轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長狀態(tài)，不建議為了趕實(shí)驗(yàn)周期而在細(xì)胞生長狀態(tài)不穩(wěn)定或較差的時候強(qiáng)行轉(zhuǎn)染。（磨刀不誤砍柴工，調(diào)整好狀態(tài)，轉(zhuǎn)染效率更佳哦?。?/span>

2、建議做好轉(zhuǎn)染預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索最合適于細(xì)胞的轉(zhuǎn)染手段及轉(zhuǎn)染體系，尤其原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等，不建議所有細(xì)胞一個轉(zhuǎn)染操作標(biāo)準(zhǔn)；同時設(shè)置工具細(xì)胞（293T）轉(zhuǎn)染對照組。（具體情況具體分析，不要想著一招鮮吃遍天哦！）

3、不同目的/片段類型推薦使用不同的轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染試劑的選擇要慎重。（別買到水貨假貨啦！~）

4、質(zhì)粒純度：A260/A280比值(1.7-1.9)，越近1.8越好；

5、質(zhì)粒濃度：細(xì)胞轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒濃度不低于500μg/μL，病毒包裝的質(zhì)粒濃度不低于0.8μg/μL；

6、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒必須用去內(nèi)毒素試劑盒去除內(nèi)毒素；

7、病毒包裝的質(zhì)粒建議采用非過濾柱型大提試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒的提取；

8、建議使用非血清型轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基；

9、轉(zhuǎn)染試劑及轉(zhuǎn)染復(fù)合物使用后立即蓋好蓋子，避免長時間暴露在空氣中，影響轉(zhuǎn)染效率；

10、不要使用凍結(jié)的或儲存溫度低于4℃的脂質(zhì)體試劑；

簡單介紹過后大家可能會迫不及待地想知道，細(xì)胞轉(zhuǎn)染到底是怎么做的呢，接下來介紹常見的轉(zhuǎn)染方法。

接下來就是欣賞我們經(jīng)典案例的時候了：

最后的最后是給客戶爸爸們的小小的建議，非常感謝各位老師們選擇我們實(shí)驗(yàn)室，為了不辜負(fù)老師們的信任，為了得到真實(shí)又靠譜的檢測結(jié)果，也為了和平與愛，我們有一些小小的要求：

① 提供質(zhì)粒的時候，最好同時提供一下質(zhì)粒圖譜，以便技術(shù)部的老師們查看篩選標(biāo)記及熒光標(biāo)簽蛋白，做轉(zhuǎn)染時也好加做一個質(zhì)粒陽性轉(zhuǎn)染對照哦。

② 由于質(zhì)粒的濃度和純度會影響轉(zhuǎn)染的效率，所以老師們提供的質(zhì)粒在郵寄給我們前，最好也做下質(zhì)粒的濃度/純度的測定。

③ 如果需要用到老師們自己提供的試劑時，郵寄前請先跟我們技術(shù)支持聯(lián)系哦，按照樣品提供要求要求進(jìn)行寄送。

這些都是避免您珍貴的樣本被浪費(fèi)，或在運(yùn)輸途中造成損失的避免方法哦~！