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        HE染色常見問題與處理方法由普拉特澤生物總結(jié)分享。一張優(yōu)質(zhì)的HE染色切片，應(yīng)該具備切片完整、無皺褶、細(xì)胞核著色清晰呈藍(lán)色、細(xì)胞質(zhì)呈鮮紅色、核仁核膜核內(nèi)染色質(zhì)顆粒清晰等特點(diǎn)，但多數(shù)切片染色新手即使是照書操作，仍然是破綻不斷，慘不忍睹。普拉特澤生物病理實(shí)驗(yàn)平臺(tái)在承接大量的HE染色代做實(shí)驗(yàn)后，積累豐富的操作經(jīng)驗(yàn)，染過多種動(dòng)植物、菌類組織樣本，總結(jié)了HE染色時(shí)常見的各種常見問題與解決方法。一起來看看吧！

        1、切片在脫蠟后出現(xiàn)大片白色的斑點(diǎn)

        原因：（1）烤(烘)片溫度太低，玻片在脫蠟前沒有充分烤(烘)干；（2）切片在二甲苯停留時(shí)間不足；（3）二甲苯使用過久，造成脫蠟不完全。

        處理方法：如果玻片是由于沒有烤(烘)干,先用無水乙醇處理去除玻片上的水分，然后重新用二甲苯進(jìn)行脫蠟處理。如果烤(烘)干不足的現(xiàn)象比較嚴(yán)重，可能導(dǎo)致切片脫落，則無法補(bǔ)救。如果白色斑點(diǎn)是由于切片在二甲苯停留時(shí)間不足造成，或使用的二甲苯過久，切片則需退回到二甲苯操作步驟，使其停留時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)些，或更換二甲苯，進(jìn)行重新染色。

        2、細(xì)胞核染色暗淡，即蘇木精染色太淡

        原因：（1）切片在蘇木精染色液停留時(shí)間太短；（2）蘇木精染色液過度氧化，失去染色能力，不能再繼續(xù)使用； （3）分化步驟處理時(shí)間過長(zhǎng)。如果是骨組織細(xì)胞核暗淡，則多數(shù)是由于脫鈣過度造成。

        處理方法：切片重新染色。如果組織在固定液固定時(shí)間過長(zhǎng)，細(xì)胞核染色能力將減弱，須增加其在蘇木精染色液的時(shí)間，或用一些方法增加組織的嗜堿性，以改善細(xì)胞核的著色。

        3、細(xì)胞核呈紅、棕色改變

        原因：蘇木精染色液過度氧化和切片在蘇木精染液染色后返藍(lán)不足。

        處理方法：首先，每次染色之前檢查蘇木精染色液的染色能力，發(fā)現(xiàn)氧化過度應(yīng)及時(shí)更換。其次，可用流水、溫水或弱堿性溶液如稀氨水、0. 2%碳酸氫鈉等，在蘇木精染色后，給切片以足夠的藍(lán)化時(shí)間。

        4、伊紅著色淡

        原因：（1）伊紅染液的pH值可能大于5；（2）藍(lán)化液殘留過多；（3）切片太薄；（4）切片經(jīng)伊紅染色后在乙醇脫水時(shí)間過長(zhǎng)。

        處理方法：檢查伊紅染液的pH值，如果必要的話，用乙酸將其調(diào)節(jié)在4～5之間，從而使伊紅染色色彩艷麗。確保每次藍(lán)化步驟完成后，使用的弱堿性溶液被充分洗去，玻片上沒有殘留的弱堿性溶液。檢查切片的厚度。脫水時(shí)不要讓切片在低濃度乙醇停留時(shí)間過長(zhǎng)，因?yàn)楹嗟牡蜐舛纫掖紩?huì)將伊紅的顏色分化掉。

        5、顯微鏡下見切片內(nèi)有大量水珠

        原因：切片經(jīng)梯度乙醇處理后沒有完全脫水，導(dǎo)致二甲苯透明中性樹膠封固后殘留大量水分。

        處理方法：移去蓋玻片，用二甲苯溶解封固劑如中性樹膠。將切片置入新鮮的無水乙醇中，待切片重新脫水完全后，用新二甲苯透明，中性樹膠封固。所有用于脫水和透明的液體，在使用一定時(shí)間以后，應(yīng)即時(shí)更換。

        6、細(xì)胞質(zhì)過染

        原因：（1）伊紅染色液濃度太高，特別是焰紅燃料、四溴四氯熒光素鈉的存在；（2）切片在伊紅染色時(shí)間過長(zhǎng)；（3）切片在伊紅染色后經(jīng)乙醇脫水步驟時(shí)過的太快，而使乙醇分化伊紅的作用不能產(chǎn)生。

        處理方法：適當(dāng)稀釋伊紅染色液，減少伊紅染色時(shí)間，或者使切片在乙醇脫水等步驟時(shí)，停留時(shí)間相對(duì)均勻。同樣，也要檢查切片的厚度是否合適。

        7、細(xì)胞核灰藍(lán)

        原因：（1）組織處理溫度過高、過熱，在石蠟停留的時(shí)間過長(zhǎng)；（2）固定時(shí)間太短，接下來就直接在高濃度的乙醇中行脫水處理。

        處理方法：理論上來說，加熱處理僅在組織浸蠟步驟才使用，組織不能在熱的蠟液中停留過長(zhǎng)時(shí)間。如果由于某些原因不能進(jìn)行下步包埋處理，完成浸蠟處理后的組織，可將組織連同塑料包埋盒一并放置在室溫空氣中，冷卻凝固，以備包埋。待需要包埋時(shí)再重新加溫直至石蠟融化即可。組織在處理前必須確保固定良好，脫水最好能從低濃度的乙醇開始。

        好啦，HE染色的常見問題與處理方法咱們就介紹到這里啦~還有不懂的直接點(diǎn)擊：《HE染色理論+實(shí)操》跟著視頻學(xué)習(xí)哦。有需要HE染色代做外包的同學(xué)歡迎留言需求哦。