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        那么免疫熒光有哪些注意事項(xiàng)呢？

        1、組織分切后，應(yīng)迅速置入冰壺，并立即送至恒溫切片機(jī)內(nèi)進(jìn)行包埋切片。

        2、如果不能馬上切片，應(yīng)將標(biāo)本立即置入零下七十度的低溫冰箱內(nèi)以保持抗原活性，防止抗原的移位或丟失，但在低溫冰箱內(nèi)放置的時(shí)間不應(yīng)超過(guò)兩日。

        3、供免疫熒光檢查的組織，應(yīng)避免接觸任何固定液，特別是含有乙醇的固定液。

        4、進(jìn)行首次熒光抗體染色時(shí)，要做對(duì)照染色。

        5、 由于熒光容易淬滅，一般僅能維持幾個(gè)小時(shí)，因此，熒光二抗應(yīng)避光保存，即從加入熒光二抗以后的步驟中都要盡量避光操作，封片后應(yīng)盡早照相。目前有市售的熒光增強(qiáng)劑，可使熒光在4℃保存1-2周仍不淬滅。

        6、 常用的熒光素有以下幾種，綠色熒光：FITC、 Alexa Fluor 488和GFP；紅色熒光：TRITC、Cy3、Alexa Fluor 568&594和Mito Tracker Red；藍(lán)色熒光：Hoechst、DAPI；黃色熒光：YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23等。

        7、不同的熒光素激發(fā)的波長(zhǎng)不同，因此，選用濾光片時(shí)要注意。一般紫外線的激發(fā)波長(zhǎng)為334-365nm，藍(lán)光的激發(fā)波長(zhǎng)為435-490 nm，綠光的激發(fā)波長(zhǎng)為546nm左右。

        8、熒光顯微鏡應(yīng)提前至少15 min打開(kāi)汞燈預(yù)熱。關(guān)閉30 min后方可再開(kāi)啟。

        9、免疫熒光的組織要求很高，載玻片及蓋玻片要干凈無(wú)雜質(zhì)。進(jìn)行熒光染色時(shí)，需注意染液的pH、濃度和染色溫度，還要避免對(duì)熒光有熄滅作用的物質(zhì)的接觸。組織和細(xì)胞也有自發(fā)熒光，如紅細(xì)胞中的血紅蛋白呈紅色熒光，維生素A呈綠色自發(fā)性熒光等。

        以上就是免疫熒光在實(shí)際操作中容易發(fā)生問(wèn)題的小細(xì)節(jié)，進(jìn)一步學(xué)習(xí)請(qǐng)點(diǎn)擊視頻學(xué)習(xí)《免疫熒光/IF染色 理論+實(shí)操》，準(zhǔn)備做免疫熒光實(shí)驗(yàn)的新手們請(qǐng)注意避雷，當(dāng)然如果您覺(jué)得比較復(fù)雜繁瑣歡迎委托給普拉特澤生物病理實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，隨時(shí)為您服務(wù)！