細胞凋亡檢測實驗注意事項——細胞凋亡實驗外包
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
流式檢測細胞凋亡注意事項介紹由普拉特澤生物流式檢測平臺總結(jié)歸納。普拉特澤生物流式檢測平臺承接細胞周期檢測、增殖檢測、凋亡檢測等流式實驗外包,擁有上千例流式實驗的經(jīng)驗,實驗快周期短,是您科研路上的鐵哥們兒哦!
凋亡細胞在形態(tài)上可見與周圍細胞脫離接觸,細胞變圓,細胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體,凋亡小體zui后被吞噬細胞吞噬消化。在凋亡過程中細胞內(nèi)容物并不釋放到細胞外,不會影響其它細胞,因而不引起炎癥反應(yīng)。
OK,話不多說我們來看看有哪些注意事項吧。
1、誘導(dǎo)培養(yǎng)檢測凋亡的細胞的時間要準確
1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前需要短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體用至離心管底,盡量避免開蓋時液體灑落出來。
2、Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質(zhì),流式檢測保存與操作時請注意避光。
3、Propidium iodide(PI)能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,所以實驗過程中一定要注意保護好自己裸露在外的皮膚,戴好手套。
4、在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留影響實驗結(jié)果。
5、PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首先進行Annexin V-FITC熱色,上機前5分鐘再加入PI熱色。
6、整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作。
7、.熒光顯微鏡下觀察細胞時,由于熒光易碎滅,觀察時要盡量快。反應(yīng)完畢后盡快檢測,因為細細胞凋廣檢測是一個動態(tài)的過程,反應(yīng)1小時后熒光強度就開始衰變。
8、成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響,如細胞類型、細胞膜上PS的密度、發(fā)生凋亡時PS翻轉(zhuǎn)的比例、誘導(dǎo)細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時間等,把這些影響因素進行優(yōu)化對實驗成功是非堂必要的。
那么用流式進行細胞凋亡檢測實驗操作中的注意事項我們就講完了,科研很累但是做對了結(jié)果很美,還有其他的主義是系那個需要補充·或者有不懂問題的可以給客服留言技術(shù)會及時回復(fù)您的,如果您有細胞凋亡檢測或生物實驗外包相關(guān)的實驗需求普拉特澤永遠在線哦~