顶级嫩模啪啪呻吟不断好爽|尹人大香蕉精品视频|飘雪电影网在线播放观看 |人人妻人人澡人人人爽人人dvd

   細胞凋亡實驗檢測詳細步驟由普拉特澤生物流式檢測平臺總結分享，普拉特澤生物為廣大科研人員提供全面的生物醫(yī)學科研實驗外包服務，真實準確，值得信賴。

   上篇我們給大家詳細解釋了什么是細胞凋亡，相信大家都有一個相對清晰的了解，那么說完了細胞凋亡的概念我們來看看如何檢測細胞凋亡，本文分享的是用流式檢測細胞凋亡的實驗步驟，一起來學習吧。

   第一步、制備凋亡檢測細胞：選擇一盤10cm皿陽性細胞，打開培養(yǎng)皿的蓋子，將細胞置于紫外線下照射2小時，或使用細胞凋亡陽性對照試劑盒提前處理陽性待測細胞。

   第二步、收集凋亡檢測細胞：將待測陰性細胞與陽性細胞的上清分別收集于15mL的離心管中，使用2mL的BSP沖洗細胞，加入1mL不含有EDTA的胰酶至37度的培養(yǎng)箱中消化，直到大片細胞都脫離培養(yǎng)皿底。用剛才收集的上清液終止消化后，轉移到剛才的15mL離心管內，放到離心機上，2000rpm室溫離心5 min，棄上清。

   第三步、清洗凋亡檢測細胞：用1mL常溫PBS重懸細胞，轉移至1.5mL離心管，棄上清，細胞清洗這一步很重要不能省略，防止影響上機檢測時的實驗結果。

   第四步、凋亡檢測細胞計數(shù)：每組取2x10^6細胞。將計數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計數(shù)板上，輕輕吹打細胞懸液,使細胞均勻分布;吸出少許細胞懸液滴在細胞入口,使細胞懸液充滿蓋玻片和計數(shù)板之間,靜置1-2 min,使細胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細胞懸液進入旁邊的槽中。在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內的細胞進行計數(shù),壓在大格四周邊線上的細胞只計數(shù)壓在2條邊線上的細胞(如右側和下方);若鏡下有2個細胞組成的細胞團,則應按單個細胞計算;若細胞團數(shù)量較多,占細胞總量的10%左右,則說明細胞分散不好會導致計算不準確,需要重新制備細胞懸液。

   第五步、凋亡檢測細胞染色：使用200uL緩沖液重懸細胞(2*106)，所有實驗組與陰性對照需要雙染，陽性對照需要設置兩個染料的單染管。雙染管加入5uLAnnexinV染料，5uL7-AAD，單染管加入單獨的5uLAnnexinV染料或5uL7-AAD，標清楚單染染料名稱。用手彈勻，避光染色15 min。染色過程中準備流式管和濾膜打開流式細胞儀，檢查鞘液和廢液情況。

   第六步、凋亡檢測細胞過濾：染色完畢后，加入1mLBPS，上離心機2000rpm，在室溫下離心5分鐘，棄上清。再加入100ulPBS重懸，過濾。

   第七步、上流式細胞儀檢測：打開SSC，FSC，BB515下的FITC通道，以及7-ADD通道，其他用不到的通道刪除，記錄檢測數(shù)據(jù)方便后期分析結果。

   到此為止，細胞凋亡實驗檢測詳細步驟我們就全部介紹完啦，還有不懂的或者補充的同學們可以給客服留言積極討論哦~有需要細胞凋亡檢測外包的老師歡迎隨時聯(lián)系普拉特澤，竭誠為您服務。