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        今天普拉特澤生物跟大家一起學習的是細胞增殖檢測的注意事項，文末附上細胞增殖檢測操作的視頻教程，目前常用的細胞增殖檢測方法有MTT法檢測細胞增殖、 CCK-8法檢測細胞增殖、 Edu法檢測細胞增殖等。下面就針對于這三種常用檢測方法的注意事項一一講述： 

        一、MTT法檢測細胞增殖注意事項：

        1、 MTT的配制：MTT對菌和光十分敏感，配制過程中注意無菌環(huán)境及避光，使用超凈臺配制時，可以將超凈臺的燈光先關(guān)掉。MTT具有致癌性，在配制的過程中，應(yīng)注意防護，避免藥物直接觸碰皮膚。

        2、細胞接種密度的確定：細胞密度控制在103-104之間。若密度太大，細胞對藥物敏感性降低；若密度過小，則差異性太小。

        3、血清的影響：高濃度的血清會對細胞的光吸收值長生影響，故細胞培養(yǎng)使用的血清濃度應(yīng)該控制在10%以下。

        4、設(shè)置凋零空和空白組，保證實驗結(jié)果的準確性。

        5、注意測試藥物是否與MTT發(fā)生反應(yīng)：某些具有氧化還原性質(zhì)的藥物，會與MTT發(fā)生反應(yīng)，將MTT還原成為棕褐色沉淀，故如存在此類藥物，應(yīng)在加入MTT前，用PBS對細胞清洗。

        6、終止培養(yǎng)，溶解結(jié)晶：去除上清時，勿將MTT結(jié)晶體吸走，操作慎重，以免影響吸光值。

        二、CCK-8法檢測細胞增殖注意事項

        1、根據(jù)所培養(yǎng)細胞的種類和細胞數(shù)量來確定細胞培養(yǎng)時間。細胞培養(yǎng)1-4小時后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目測或使用酶標儀觀察染色程度，若染色不充分，再將細胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

        2、保證培養(yǎng)箱和培養(yǎng)板中間孔的濕度。培養(yǎng)板中間孔的濕度可以使用PBS填充邊緣孔的方法來解決。

        3、添加CCK-8試劑時，速度要快，避免藥劑在墻頭上停留時間過長，對藥物濃度產(chǎn)生影響。也可在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8。

        三、EDU法檢測細胞增殖注意事項

        1、加入含有Edu的培養(yǎng)基時，培養(yǎng)基的用量以沒過細胞為適宜。

        2、根據(jù)培養(yǎng)細胞種類不同，確定細胞生長周期，再進一步確定Edu培養(yǎng)基的培養(yǎng)時間，大多數(shù)細胞為2小時培育時間。

        3、固定細胞前，使用PBS清洗未進入細胞DNA的Edu，一般清洗次數(shù)為1-2次，每次5分鐘，也根據(jù)不同的細胞選擇清洗強度，避免細胞流失，造成密度不同。

        4、染色完成后，最好立即進行觀察 。如若條件限制，請4℃避光保存，保存時間不宜過長，不超過3天。

        好啦，那關(guān)于MTT檢測、CCK8檢測、EDU檢測細胞增殖時的注意事項我們就總結(jié)完啦，視頻操作請點擊：細胞實驗。實驗因個體操作的原因大家要注意的問題肯定更多，歡迎大家留言補充自己總結(jié)的細胞增殖操作是的注意事項，有需要細胞增殖檢測實驗外包的服務(wù)的老師也歡迎大家留言咨詢。