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實驗介紹
【應用簡介】
肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展至肝硬化的共同病理學基礎(chǔ)，雖然對肝纖維化的研究已從細胞水平進入分子水平，但肝纖維化動物模型的建立，仍是臨床研究和實驗研究的重點和難點。肝纖維化動物模型的建立，既可以深入全面地研究肝纖維化發(fā)病機制，又可以為臨床篩選防治肝纖維化藥物提供基礎(chǔ)研究。
【肝纖維化模型構(gòu)建】
目前肝纖維化動物模型可分為基因相關(guān)模型與非基因模型，前者主要是指工程動物模型，非基因模型主要指在相同或相似的遺傳背景下，通過環(huán)境因素，藥物/毒物或其它因素誘導得到的肝纖維化模型。
肝纖維化常用模型有化學試劑誘導法（四氯化碳誘導，硫代乙酰胺誘導），膽管阻塞法（膽管結(jié)扎或寄生蟲），乙醇誘導法以及免疫法。
【實驗方法】
一、化學試劑誘導法
致病機理：
四氯化碳在肝細胞內(nèi)經(jīng)CYP2E1代謝產(chǎn)生的自由基可以損傷細胞膜，從而破壞肝細胞的結(jié)構(gòu)和功能，造成肝細胞壞死。同時，肝臟內(nèi)的星型細胞會活化，釋放Ⅳ型膠原酶，降解ⅳ型膠原，合成分泌ⅰ型膠原，而引起膠原沉積和肝纖維化。
動物準備：
雄性的BALB / c小鼠10周齡（BALB / C比C57敏感，造模成功率更高）或SD大鼠（雄性200克左右）等，橄欖油，四氯化碳，注射器，電子天平。
實驗步驟：
1、配制四氯化碳溶液，四氯化碳與橄欖油按照體積比1：4混勻，備用；
2、按小鼠體重0.5μl/ g CCl4（2.5μlCCl4橄欖油溶液）腹腔注射，每周2次，持續(xù)6周。空白對照組僅注射橄欖油2.5μl/ g；
3、在連續(xù)給CCl4 2周后，可隨機抽取對照組和造模組小鼠各3只，檢測ALT，AST，TBL以及切片等是否造模成功；
如圖4所示，若模型成功，即可進行藥物評價，繼續(xù)處理4周后，即可處死小鼠，檢測肝纖維化相關(guān)的標記，評價藥物效果。
二、膽管結(jié)扎致肝纖維化
致病機理：
通過手術(shù)結(jié)扎膽總管的方法，模擬臨床上由于膽汁淤塞引起的肝疾病。
動物準備：
雄性C57，只BALB / c小鼠（10周齡左右）或雄性SD大鼠（200克左右）器械：擴創(chuàng)鉤，鑷子，尖頭剪刀，持針鉗，圓針，角針，鈍性剪刀，刀柄，創(chuàng)巾，棉簽，剃毛刀，酒精棉球，碘伏，注射器，縫合線（3號）。
實驗步驟：
1、術(shù)前麻醉，固定；
2、術(shù)部剃毛，擦碘伏，75％酒精脫碘，鋪創(chuàng)巾；
3、沿腹中線剪開皮膚，鈍性剪刀分離皮下的脂肪和肌肉；
4、皮膚上開到尖狀軟骨處，拉牽引線，生理鹽水沖洗腹腔，擴創(chuàng)鉤使皮膚兩側(cè)撐開；
5、棉簽沾生理鹽水撥開肝臟，腸，胰等臟器，在肝臟底部尋找并暴露出膽管（大鼠沒有膽囊，在肝臟和十二指腸中間找，小鼠沿著膽囊和十二指腸找）膽管下可看到門靜脈血管，與門靜脈血管平行的透明黃色的為膽管如下圖所示：
6、用鑷子撥開膽管覆蓋及周邊的脂肪（一定要剝離干凈周邊的脂肪，否則容易造成結(jié)扎線滑脫），找到后把鑷子伸到膽管下方撥開脂肪，絲線穿過鑷子，在膽管處打結(jié)，可扎2道防止造模不成功，生理鹽水沖洗腹腔；
7、將內(nèi)臟歸位，先把腹膜縫在一起，然后再將皮膚縫合；
8、每天碘伏消毒，75％酒精亦可；
9、對照組與結(jié)扎組操作一致，僅不扎線。
圖片介紹
【實驗流程圖】
【優(yōu)秀案例圖】
技術(shù)總結(jié)
【常見問題】
1、滴注博來霉素后短時間內(nèi)小鼠死亡
答：可能原因如下，a、藥物濃度偏高；b、滴注體積過大；c、麻醉過量致死；d、氣管縫合時有血液滲入導致小鼠死亡。
【注意事項】
1、滴注后應將小鼠頭部抬起，使藥物緩緩滲入氣管、支氣管；
2、選擇合適周齡的小鼠進行試驗。
送檢與交付標準
【交付標準】
固定組織、實驗報告
【送檢流程】
動物及藥物代采購
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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